SMAD1基因对黔北麻羊卵巢颗粒细胞的影响及组织表达分析

• 作者: 吴雨 周志楠 唐文 张艳 敖叶 洪磊 陈祥 韦仕南
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 黔北麻羊 SMAD1基因 卵巢颗粒细胞 差异表达 产羔性状
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 生物技术与繁殖
• 页码范围: 1607-1618
• 页数: 12页
• 分类号: S827.3
• 字数: 8634字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2020.07.013

摘要

旨在验证SMA D1基因在转录组测序中单羔组对多羔组上调的结果,并探究SMA D1基因对黔北麻羊产羔性状的影响.本试验选取健康、体重45 kg、4岁左右的单、多羔黔北麻羊母羊为研究对象,采用qRT-PCR法检测SMA D1基因在单、多羔组黔北麻羊母羊子宫、输卵管、垂体、下丘脑及卵巢组织的表达水平,PCR扩增黔北麻羊SMAD1基因CDS区,构建pEGFP-N3-SAMD1重组质粒,利用脂质体转染法转染pEGFP-N3-SAMD1重组质粒进入卵巢颗粒细胞,分为超表达SMA D1试验组和pEGFP-N3空载体对照组,通过检测培养基中雌二醇和孕酮的浓度,利用CCK-8法和Annexin V-FITC法检测超表达SMA D1基因对卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的影响,qRT-PCR检测超表达SMAD1基因对SAMD1、GnRHR、FSHR、BMP4、TIMP3基因mRNA表达的影响,来探究SMAD1基因对卵巢颗粒细胞的影响.结果表明,SMA D1基因在黔北麻羊各组织中均有表达.组间比较可知,卵巢和下丘脑组织单羔组极显著高表达于多羔组(P<0.01),输卵管组织中单羔组显著高表达于多羔组(P<0.05),其他组织未达到差异显著性(P>0.05).本研究成功克隆了SMAD1基因CDS序列,未发现突变位点,并将pEGFP-N3-S A M D1重组质粒转染进入卵巢颗粒细胞,转染试验组培养基中E2含量在12、48 h显著高于对照组(P<0.05),P4含量在12 h显著高于对照组(P<0.05);超表达SMA D1基因对细胞增殖在24 h达到显著促进作用(P<0.05),48、72 h达到极显著促进作用(P<0.01),并且发现超表达SMA D1基因对卵巢颗粒细胞的凋亡具有抑制作用,与SMAD1基因对卵巢颗粒细胞增殖具有促进的结果是相符的.SMAD1基因超表达后繁殖相关基因GnRHR、FSHR、BMP4、TIMP3 mRNA的表达极显著降低(P<0.01).综上表明,SMAD1基因超表达可提高E2、P4的生成,有助于黔北麻羊发情及妊娠的维持,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,也极显著抑制繁殖相关基因mRNA的表达,而这些繁殖相关基因都能够调控卵泡数、卵泡的发育与形成以及排卵.因此,SMA D1基因能够抑制这些基因的表达,致使黔北麻羊单羔组受胎率低,进而降低产羔数,这为产羔性状相关基因的研究提供了理论基础,初步认为SMA D1基因可作为探究影响山羊产羔性状的候选基因.