黔北麻羊RARRES1基因的克隆表达及功能初步研究

• 作者: 周志楠 唐文 敖叶 洪磊 陈浩瀚 陈祥
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 黔北麻羊 RARRES1基因 超表达载体 干扰载体 卵泡颗粒细胞
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 遗传育种
• 页码范围: 1548-1562
• 页数: 15页
• 分类号: S827.2
• 字数: 10623字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2020.07.008

摘要

旨在对黔北麻羊视黄酸受体应答蛋白1(retinoic acid receptor responder 1,RA RRES1)基因的功能进行初步探究.本研究首先利用PCR扩增克隆得到黔北麻羊RA RRES1基因编码的完整序列,应用生物信息学方法分析黔北麻羊RARRES1蛋白理化性质、高级结构、疏水性、氨基酸同源性及亚细胞定位,并构建系统进化树,同时应用qRT-PCR法检测RA RRES1基因在单、多羔黔北麻羊不同组织中的表达水平,随后构建目的基因pEGFP-N3-RARRES1真核表达载体与pGPH1/GFP/Neo-RARRES1 RNA干扰载体,并转染至黔北麻羊卵泡颗粒细胞,利用qRT-PCR法从细胞水平检测并分析目的基因真核表达载体与RNA干扰载体对目的基因RA RRES1及多胎性状候选基因BM PR-IB mRNA表达的影响.qRT-PCR结果显示,RA RRES1 mRNA在卵巢中的表达量最高,单羔组黔北麻羊卵巢组织中的表达量极显著高于多羔组(P<0.01).生物信息学分析表明,黔北麻羊RARRES1基因共编码289个氨基酸,RARRES1是一种定位在细胞质中的亲水性蛋白,蛋白质二级结构分析显示,其主要是由α-螺旋与无规则卷曲构成,三级结构预测与二级结构分析一致;同源性以及系统进化树结果显示,黔北麻羊RA RRES1基因序列与绵羊、牛的同源性高、遗传距离近,与鸡的同源性最低、遗传距离最远.经双酶切、测序验证后,表明目的基因pEGFP-N3-RARRES1真核表达载体与pGPH1/GFP/Neo-RARRES1干扰载体构建成功.将各载体转染至黔北麻羊卵泡颗粒细胞后,与空白对照相比,重组质粒pEGFP-N3-RARRES1能极显著提高RA RRES1与BMPR-IB的表达量(P<0.01).在各干扰载体中,重组质粒pGPH1/GFP/Neo-RARRES1-4的抑制效率最好,能够显著与极显著下调RARRES1与BMPR-IB mRNA在卵泡颗粒细胞中的表达量(P<0.05,P<0.01).本研究克隆了黔北麻羊RA RRES1基因编码的完整序列并进行了生物信息学分析.将重组质粒pEGFP-N3-RARRES1、pGPH1/GFP/Neo-RARRES1成功转染至黔北麻羊卵泡颗粒细胞并验证其表达变化.结果表明,RARRES1可能对山羊多胎性状具有促进作用,为进一步探究RA RRES1基因对山羊多胎性状的调控机理提供依据.