B型流感病毒NP蛋白双单克隆抗体夹心ELISA检测方法的建立

• 作者: 于萌萌 张振宇 徐菱 王晓钧 郭兴
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: B型流感病毒 NP蛋白 双单克隆抗体夹心ELISA
• 年，卷（期）: 2020,（8）
• 所属期刊栏目: 诊断和检测技术
• 页码范围: 779-785
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.201912036

摘要

为建立B型流感病毒(IBV)快速诊断方法,本研究采用真核表达系统表达并纯化了IBV中高度保守的核糖核蛋白(NP),以其为抗原,免疫小鼠制备IBV NP蛋白单克隆抗体(MAb),选取抗原表位长、特异性强的MAb2B3-5作为捕获抗体,选取抗原表位短、灵敏度高的MAb 3C3-7经HRP标记后作为检测抗体,经条件优化,建立了检测IBV NP蛋白的双MAb夹心ELISA检测方法.结果 显示,该检测方法捕获抗体包被量为每孔100 ng,检测抗体使用量为每孔20 ng,NP蛋白浓度在3.9 ng/mL～62.5 ng/mL时与OD450nm呈良好的线性关系,相关系数R2＞0.99.利用该ELISA方法对多种病毒进行检测,结果显示该方法仅能与IBV发生反应,表明该方法特异性强;灵敏度试验结果显示,该方法对病毒NP蛋白的最低检测限为13.26 ng/mL,敏感性高;批内和批间重复性变异系数均小于8％,重复性好;捕获抗体可在25 ℃和37℃保存4d,热稳定性好.利用本实验建立的ELISA方法和qPCR方法对本实验室保存的40份人咽拭子进行检测,该方法与qPCR方法相比符合率为70％,表明本研究建立的方法可用于临床检测.本研究建立的ELISA检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为B型流感的快速诊断、NP蛋白功能研究及定量检测提供技术支持.