牛细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立

• 作者: 乔薪瑗 于晓丽 姜艳平 崔文 李木子 狄亚心 王一晗 秦松跃 赵飞鹏
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛细小病毒 VP2蛋白 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA
• 年，卷（期）: 2020,（8）
• 所属期刊栏目: 诊断和检测技术
• 页码范围: 791-796
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.201911024

摘要

为建立一种快速检测牛细小病毒(BPV)的方法,本研究通过PCR扩增BPV VP2基因,构建pProHTa-BPV-VP2重组表达载体,转化后获得重组大肠杆菌,通过诱导表达获得VP2重组蛋白,将其纯化后免疫小鼠(100 μg/只),经细胞融合、克隆和筛选共获得了5株阳性杂交瘤细胞株,分别命名为5G9、2B5、6A3、7E8和2B6.经鉴定,其分泌抗体亚型分别为IgG2a、IgG2b、IgM、IgM和IgA.间接免疫荧光结果显示,5株单克隆抗体(MAb)与BPV均可发生特异性反应.同时,将纯化后的BPV VP2重组蛋白免疫新西兰兔,制备兔抗BPV VP2多抗.利用制备的2B5作为检测抗体,BPV VP2多抗作为捕获抗体,初步建立检测BPV的双抗体夹心ELISA方法.该方法的特异性试验结果显示,除BPV外,与牛轮状病毒、猪伪狂犬病毒、猪传染性肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、牛病毒性腹泻病毒均不发生反应.敏感性试验结果显示,该方法对BPV最低检出量为3.125×102.8TCID50/mL.重复性试验结果显示,该方法批内、批间变异系数均小于10％.利用该方法对269份临床猪腹泻病料样品进行检测,检出BPV阳性样品14份,与PCR方法符合率达100％.综上,本研究利用抗BPV VP2蛋白的MAb和兔抗BPV VP2多抗建立了双抗体夹心ELISA方法,该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,为BPV感染的快速诊断提供一种有效的检测方法,并为流行病学研究和疫病防控提供一种可靠的手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	乔薪瑗		54	297	9.0	14.0
2	姜艳平		51	283	10.0	15.0
3	崔文		49	148	7.0	9.0
4	李木子		7	30	3.0	5.0
5	赵飞鹏		1	0	0.0	0.0
6	于晓丽		1	0	0.0	0.0
7	秦松跃		1	0	0.0	0.0
8	狄亚心		1	0	0.0	0.0
9	王一晗		1	0	0.0	0.0