脐带间充质干细胞来源的外泌体-温敏水凝胶的构建及侵入性观察

• 作者: 周凌燕 张彤 杨嘉旖 林凯桑 沈洁 潘道延 胡世弟 陈智毅
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 外泌体 脐带间充质干细胞 水凝胶 温敏水凝胶 糖尿病慢性难愈性溃疡 脐静脉内皮细胞 细胞实验
• 年，卷（期）: 2020,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 53-56
• 页数: 4页
• 分类号: R587.2
• 字数: 4023字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2020.09.013

摘要

目的 构建脐带间充质干细胞来源的外泌体-温敏水凝胶,观察其温敏性和侵入性.方法 取脐带间充质干细胞株Saliai-HMSC(UC)-N,采用沉淀法提取外泌体,PBS重悬后获得脐带间充质干细胞来源的外泌体重悬液.取Pluronic F-127粉末,避光条件下按20％、22％、24％、26％、28％的浓度梯度分别加入脐带间充质干细胞来源的外泌体重悬液,吹打、静置后,即得到20％、22％、24％、26％、28％浓度的外泌体-温敏水凝胶溶液.将不同浓度的外泌体-温敏水凝胶溶液加入恒温水浴锅,测定初始凝胶化温度、37℃初始凝胶时间.使用PKH67对外泌体进行标记,配置PKH67标记的脐带间充质干细胞来源的外泌体重悬液和PKH67标记的24％浓度的外泌体-温敏水凝胶溶液.取脐静脉内皮细胞分成外泌体组、外泌体-温敏水凝胶组.外泌体组加入PKH67标记的脐带间充质干细胞来源的外泌体重悬液,外泌体-温敏水凝胶组加入PKH67标记的24％浓度的外泌体-温敏水凝胶溶液.两组细胞避光孵育12 h后,滴加稀释的DAPI细胞核染色液,避光孵育30 min,置于荧光倒置显微镜下观察细胞内绿色荧光(绿色荧光为PKH67标记的外泌体)分布情况,并使用Image J软件计算绿色荧光光密度百分比、绿色荧光面积百分比.结果 20％、22％、24％、26％、28％ 浓度的外泌体-温敏水凝胶溶液的初始凝胶化温度分别为(17.8±0.7)、(16.6±0.3)、(14.6±0.5)、(13.4±0.3)、(12.4±0.1)℃,37℃初始凝胶时间分别为(92±6)、(79±5)、(68±3)、(51±3)、(46±2)s,各浓度外泌体-温敏水凝胶溶液的初始凝胶化温度、37℃初始凝胶时间相比,P均<0.05,表明随着温度的变化,外泌体-温敏水凝胶的温敏特性随之变化,而24％浓度的外泌体-温敏水凝胶溶液应用更为简便.外泌体组、外泌体-温敏水凝胶组绿色荧光点分布在细胞质内,并于细胞核周围富集.外泌体组绿色荧光光密度百分比、绿色荧光面积百分比分别为0.02％ ±0.01％、0.11％ ±0.01％,外泌体-温敏水凝胶组绿色荧光光密度百分比、绿色荧光面积百分比分别为0.21％ ±0.05％、1.30％ ±0.12％,两组相比,P均<0.05.结论 成功构建了脐带间充质干细胞来源的外泌体-温敏水凝胶,具有良好的温敏性和侵入性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈洁		128	654	12.0	20.0
2	林凯桑		3	5	2.0	2.0
3	张彤		8	27	4.0	4.0
4	陈智毅		3	8	2.0	2.0
5	胡世弟		4	8	2.0	2.0
6	潘道延		9	39	3.0	6.0
7	杨嘉旖		1	0	0.0	0.0
8	周凌燕		5	12	2.0	3.0