应用ITS2条形码及种子形态鉴定柴胡属种子

• 作者: 刘长利 戚文涛 李剑超 王晨 罗容
• 来源期刊: 中国实验方剂学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 柴胡属 种子 传统形态学 DNA条形码 核糖体DNA第二内部转录间隔区(ITS2) 二级结构 聚合酶链式反应(PCR)
• 年，卷（期）: 2020,（11）
• 所属期刊栏目: 药学基础
• 页码范围: 170-177
• 页数: 8页
• 分类号: R22|R931|R282|Q523|C37
• 语种: 中文
• DOI: 10.13422/j.cnki.syfjx.20201055

摘要

目的:采用传统形态鉴定方法结合DNA条形码分子检测技术准确鉴定柴胡属种子.方法:收集41份市售柴胡属种子和GenBank数据库中下载15个品种75条核糖体DNA第二内部转录间隔区(ITS2)序列.利用体视显微镜和游标卡尺进行种子外观形态特征的观察和记录,测定千粒重.提取种子的基因组DNA,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增,双向测序得ITS2序列.基于BLAST法,邻接(NJ)系统进化树法,Kimura双参数模型(K2P)遗传距离法和ITS2序列二级结构进行物种鉴定.结果:不同基原的柴胡属种子在长、宽、横切面及千粒重等方面存在细微的差别;柴胡种子的ITS2序列有2个种内变异位点,3种单倍型,种内最大遗传距离0.009小于种间最小遗传距离0.032;NJ系统进化树中柴胡和狭叶柴胡分别聚为独立一支,具有良好的单系性;ITS2序列二级结构可以弥补NJ树在变种鉴定方面的不足.41份柴胡属种子样品中有30份柴胡,3份狭叶柴胡,5份三岛柴胡,2份藏柴胡及1份小叶黑柴胡.结论:市售柴胡种子存在来源多样、基原混乱的问题.基于ITS2条形码和种子形态鉴定相结合的方法可以准确鉴定柴胡属种子,为制定柴胡种子质量标准,规范柴胡种植,从源头解决柴胡药材质量问题提供科学依据,并为其他药用植物种子或者种子类药材的准确鉴定提供参考.