产物可直接进行"TA"克隆的高保真PCR法

• 作者: 孙达权 张钦真 湛钊 石松 胡桐 薛殿婷
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 聚合酶链式反应 DNA聚合酶 "TA"克隆 DNA突变
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 动物科学·生物技术
• 页码范围: 109-111,116
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3144字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2020.05.030

摘要

[目的]介绍一种PCR产物直接进行"TA"克隆的高保真PCR法,减少高保真PCR产物"TA"克隆的中间步骤.[方法]Trizol法提取人肝癌细胞SMMC-7721总RNA,并将mRNA反转录成cDNA.以cDNA为模板,联合不同特性的Taq DNA聚合酶扩增PKC基因的蛋白编码区.PCR产物经纯化后进行"TA"克隆、细菌转化、筛选培养、质粒抽提、酶切鉴定和测序鉴定等.[结果]高保真DNA聚合酶扩增的PCR产物未发现DNA突变,但不能直接进行"TA"克隆.Taq DNA聚合酶扩增的产物可直接进行"TA"克隆,但其内部存在多个突变位点,保真性明显不足.联合使用高保真DNA聚合酶和Taq DNA聚合酶(双酶联用)扩增的PCR产物可直接进行"TA"克隆,且DNA测序未发现突变.[结论]双酶联用PCR可以获得高保真PCR产物,并直接进行"TA"克隆.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙达权	贵州医科大学基础医学院	15	11	1.0	2.0
2	石松	贵州医科大学基础医学院	6	1	1.0	1.0
3	薛殿婷	贵州医科大学基础医学院	4	0	0.0	0.0
4	湛钊	贵州医科大学基础医学院	2	1	1.0	1.0
5	张钦真	贵州医科大学基础医学院	1	0	0.0	0.0
6	胡桐	贵州医科大学基础医学院	1	0	0.0	0.0