甘蓝型油菜BnMAPK1的原核表达、亚细胞定位及酵母双杂交文库筛选

• 作者: 王珍 姚梦楠 张晓莉 曲存民 卢坤 李加纳 梁颖
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 甘蓝型油菜 BnMAPK1 原核表达 亚细胞定位 酵母双杂交
• 年，卷（期）: 2021,（9）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 1312-1321
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1006.2020.04019

摘要

植物的丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-Activated Protein Kinases, MAPKs)级联是生长进程中多种信号跨膜传递的共同通路, 它可以将外源刺激转入细胞内并引发细胞应答。目前C族MAPKs在甘蓝型油菜中的研究报道还很有限。本研究通过1个甘蓝型油菜的C族BnMAPK1基因的生物学进程聚类分析发现, BnMAPK1可能参与蛋白磷酸化、生长素介导的信号途径、逆境应答、细胞周期及转录等过程。BnMAPK1具有369个氨基酸残基, 其相对分子质量约为42.5 kD, 其可溶性蛋白可在原核系统中被诱导表达。BnMAPK1的亚细胞定位结果显示, BnMAPK1主要在细胞核内表达。Bait质粒pGBKT7-BnMAPK1在酵母双杂交系统中无毒性及自激活活性。为深入研究BnMAPK1蛋白参与的生物学进程, 从甘蓝型油菜中油821苗期根、茎、叶中分别提取总RNA, 分离得到mRNA, 利用SMART技术合成并纯化双链cDNA后建立甘蓝型油菜混合cDNA文库。以共转化法筛选与BnMAPK1相互作用的蛋白, 对其分析与鉴定显示, BnMAPK1在生长发育、非生物及生物逆境、转录、蛋白合成及代谢、翻译及翻译后修饰等过程中起作用。研究结果为MAPKs级联, 尤其是C族MAPKs的研究提供了新的视野, 为甘蓝型油菜抗性的机理研究及分子育种奠定了重要的理论依据。