甘蓝型油菜温敏GMS TE5A幼蕾酵母双杂交cDNA文库的构建及筛选

• 作者: 吴刚 曾新华 李可琪 王莎莎 闫晓红
• 来源期刊: 中国油料作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 甘蓝型油菜 温敏细胞核雄性不育 酵母双杂交cDNA文库 BnaA.tsMs 互作蛋白
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 遗传育种
• 页码范围: 292-299
• 页数: 8页
• 分类号: S565.403
• 字数: 5701字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7505/j.issn.1007-9084.2016.03.004

摘要

为进一步解析甘蓝型油菜温敏细胞核雄性不育系(GMS) TE5A的不育机理,筛选与育性蛋白BnaA.tsMs 互作的重要蛋白.提取不育系TE5A的幼蕾(直径≤2mm)总RNA,利用SMART (switching mechanism at 5'end of the RNA transcript)技术构建酵母双杂交cDNA文库和诱饵载体pGBKT7-BnaA.tsMs,转化酵母菌株Y2H gold,检测其毒性和自激活活性,通过Mating方法筛选与蛋白BnaA.tsMs互作的蛋白,并根据基因注释推测其功能.结果成功地构建了甘蓝型油菜温敏细胞核雄性不育系TE5A幼蕾酵母双杂交cDNA文库,文库库容量为2×107cfu,重组率达到100％,插入片段平均长度大于1.8kb.发现诱饵载体pGBKT7-BnaA.tsMs对酵母没有毒性,没有自激活活性.筛选出49个候选互作蛋白,其中有丝分裂纺锤体检测点蛋白(BUBR0)、周期蛋白D3(cyc1in-D3)和F-box蛋白(FBW2)三个互作蛋白可能与该不育蛋白相互作用,共同调控该不育系TE5A的育性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	闫晓红	中国农业科学院油料作物研究所农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室	4	28	3.0	4.0
2	李可琪	中国农业科学院油料作物研究所农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室	1	1	1.0	1.0
6	王莎莎	中国农业科学院油料作物研究所农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室	5	6	2.0	2.0
7	曾新华	中国农业科学院油料作物研究所农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室	2	4	1.0	2.0