骨髓间充质干细胞对急性重症胰腺炎大鼠的炎症抑制作用及对TLR4/NF-κBp65通路的关系

• 作者: 秦亚飞 霍星光 李秋霞 徐玉生
• 来源期刊: 中国普通外科杂志
• 关键词: 胰腺炎,急性坏死性 间质干细胞移植 炎症 Toll样受体4 大鼠
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究|BASIC RESEARCH
• 页码范围: 294-304
• 页数: 11页
• 分类号: R657.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.7659/j.issn.1005-6947.2021.03.007

摘要

背景与目的:急性重症胰腺炎(SAP)为临床常见急危重症之一,炎症反应在其发生发展中发挥重要作用.目前认为骨髓间充质干细胞(MSC)移植具有修复SAP胰腺组织损伤潜能,但具体功能尚不清楚.本研究在SAP大鼠模型上探讨骨髓MSC对SAP炎症的抑制作用及机制.方法:分离、培养、鉴定SD骨髓MSC,并制成1.0×106/mL的悬浮液;以3.5％牛磺脱氧胆酸钠逆行胰胆管注射建立SD大鼠SAP模型,取造模成功36只大鼠随机均分为4组,分别于造模后12h后腹腔注射生理盐水(模型组)、腹腔注射MSC悬浮液(腹腔注射组)、尾静脉注射MSC悬浮液(尾静脉注射组)、腹腔联合尾静脉注射MSC悬浮液(联合注射组),注射剂量10 mL/kg;另取9只大鼠行假手术(假手术组),并在术后12h腹腔注射等量生理盐水.治疗后24 h,处死各组大鼠获取血液与胰腺组织标本.用HE染色法观察胰腺组织病理形态学,进行病理评分;采用碘比色法检测大鼠血清淀粉酶(AMS)水平,甲基试卤灵底物法检测血清脂肪酶(LPS)水平;ELISA法检测胰腺组织IL-6、IL-1 β、TNF-α含量;羟胺法检测过氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)浓度;RT-PCR检测Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κ Bp65的mRNA相对表达量;Western blot法检测TLR4、MyD88、NF-κ Bp65、p-NF-κ Bp65蛋白表达量.结果:骨髓MSC呈梭形、漩涡样生长;低表达CD45(1.25％),高表达CD90(99.89％);细胞活力良好.与假手术组比较,其余各组胰腺组织均有不同程度的病理改变,血清AMS与LPS水平、胰腺组织IL-6、IL-1 β、TNF-α、MDA含量升高,而SOD活性降低,以及TLR4、MyD88 mRNA与蛋白相对表达量、p-NF-κ Bp65/NF-κ Bp65升高(均P＜0.05).但以上指标的变化程度在模型组、腹腔注射组、尾静脉注射组、联合注射组依次明显降低,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论:骨髓MSC移植可抑制SAP大鼠炎症反应,减轻氧化应激反应,修复胰腺组织损伤,作用机制可能与调控TLR4/NF-κ Bp65通路有关.