摘要:
目的 探讨糖皮质激素(GC)在儿童原发性免疫性血小板减少症(ITP)治疗中的应用及对miR-15a表达的影响,为逆转GC抵抗及实现ITP的个体化治疗提供参考依据.方法 选取2018年3月-2019年8月我院血液科住院治疗的患儿为研究对象,共50例,在50例ITP患儿中,治疗组为:28例ITP患儿接受了GC治疗(根据GC疗效分为GC敏感组18例和GC抵抗组10例);另外,空白对照组为:22例为ITP患儿未接受GC治疗.采用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC).采用SYBR green实时荧光定量PCR对纳入研究的患者的糖皮质激素受体α(glucocorticoid receptor alpha,GRα)、糖皮质激素受体β(glucocorticoid receptor beta, GRβ)、糖皮质激素受体γ(glucocorticoid receptor gamma,GRγ)和糖皮质激素受体p(glucocorticoid receptor p,GRp)miR-15a的mRNA表达水平进行检测.对比分析ITP患儿治疗组(GC敏感组和GC抵抗组)与空白对照组,GC敏感组和GC抵抗组GR亚型表达的差异.采用Western blot检测ITP患儿GC敏感组、GC抵抗组和空白对照组的GRα和GRβ蛋白水平.并且提取各组的血清样本PBMC中GRα和GRβ miR-15a的表达水平进行检测,并比较组间差异.结果 ITP患儿治疗组(GC敏感组和GC抵抗组)GR亚型miR-15a表达差异大于空白对照组,患儿组GRα和GRβmiR-15a的表达水平高于空白对照组(P<0.05),患儿GC敏感组GRαmiR-15a为1.26(0.43~3.28),空白对照组为0.97(0.32~1.52);患儿GC敏感组GRβmiR-15a为0.07(0.01~0.51),空白对照组为0.03(0.01~0.06).GR β、γ、p含量较低,在部分患儿中无法检出.ITP患儿治疗组(GC敏感组和GC抵抗组)与空白对照组GRγ和GRp miR-15a表达无显著差异(P>0.05).GC敏感组和GC抵抗组GRα、GRβ、GRγ和GRpmiR-15a的表达均无显著差异(P>0.05),但GRα在GC敏感组为1.13(0.32~2.75),GC抵抗组为0.84 (0.36~3.11),在GC敏感组呈升高趋势;GRγ在GC敏感组为0.22(0.06~1.47),GC抵抗组为0.31 (0.01~3.26),GRγ在GC抵抗组呈上升趋势.GC敏感组GRα蛋白明显高于GC抵抗组(P<0.05).GRβ蛋白在3组均未检出.结论 ITP患儿的受体亚型表达数据范围较广,而空白对照组儿童GR亚型表达水平较稳定,数据范围较小,提示患儿的GR亚型表达水平可能受多因素调控,且ITP属于一种病因未明的疾病.初治ITP患儿存在GR表达水平上升,主要表现为GRα和GRβ3表达水平上升.结合GRαmiR-15a在GC敏感组呈上升的趋势,GRα蛋白表达水平在GC敏感组明显上升,推测GRp可能对GC效应起到介导作用,但仍需进行深入研究以验证.