DNA甲基转移酶3b对乳腺癌细胞微小RNA表达的影响

• 作者: 王奕丹 王一涵 黄钰雯 阴迪 于运 刘丽梅
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: DNA甲基转移酶3b 乳腺癌 微小RNA
• 年，卷（期）: 2021,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 116-123
• 页数: 8页
• 分类号: R446.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.12007/j.issn.0258-4646.2021.02.005

摘要

目的 通过DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)与siRNA干扰改变乳腺癌细胞MCF-7中DNA甲基化水平,探讨DNA甲基转移酶3b(Dnmt3b)表达对乳腺癌细胞相关mRNA、微小RNA(miRNA)的影响.方法 通过5-Aza-CdR抑制乳腺癌细胞整体甲基化水平,免疫荧光染色检测其抑制效果,高通量测序检测乳腺癌细胞miRNA的表达,荧光定量PCR(qRT-PCR)检测乳腺癌细胞miRNA及乳腺癌相关基因的表达;通过siRNA干扰抑制乳腺癌细胞中Dnmt3b的表达,qRT-PCR和Western blotting检测siRNA干扰效率,细胞生长曲线反映细胞生长情况.结果 5-Aza-CdR降低细胞整体甲基化水平,siRNA干扰后Dnmt3b的表达下降,细胞生长显著抑制;高通量测序显示5-Aza-CdR作用后67个miRNA表达有统计学差异(均P<0.05);qRT-PCR结果显示5-Aza-CdR作用后乳腺癌细胞中miR-200a、miR-411、miR-382、miR-409、miR-493、miR-127、miR-520a、miR-654表达显著上调(P<0.05);siRNA干扰Dnmt3b后乳腺癌细胞中miR-29b、miR-506、miR-200a、miR-203b、miR-409、miR-520a、miR-654的表达显著上调(P<0.05),而miR-200b、miR-127的表达显著下调(均P<0.05);5-Aza-CdR作用后乳腺癌细胞WWOX、MMP7的表达下调,TCF21、TIMP1的表达上调(均P<0.05);siRNA干扰Dnmt3b后乳腺癌细胞抑癌基因BRCA1、BRCA2及癌基因MMP7、survivin的表达均下调(均P<0.05).结论 Dnmt3b可影响乳腺癌细胞相关基因WWOX、TCF21、BRCA1、BRCA2、MMP7、TIMP1、PKM2、survivin及miR-29b、miR-506、miR-200a、miR-200b、miR-203b、miR-409、miR-127、miR-520a、miR-654的表达.