番茄GSNOR互作蛋白的筛选与鉴定

• 作者: 郭兆来 乔圣泰 李昆志 徐慧妮
• 来源期刊: 昆明理工大学学报（自然科学版）
• 关键词: 番茄 GSNOR 蛋白互作 酵母双杂交
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 生命科学与医学|Life Science and Medicine
• 页码范围: 95-101
• 页数: 7页
• 分类号: Q782
• 语种: 中文
• DOI: 10.16112/j.cnki.53-1223/n.2021.01.251

摘要

前期研究表明番茄S-亚硝基谷胱甘肽还原酶(GSNOR)基因参与硝酸盐胁迫应答,但其作用机理尚不清楚.本研究构建诱饵载体pGBKT7-GSNOR,将其转化至酵母感受态细胞Y2HGold中,结果显示重组质粒无自激活活性.利用酵母双杂交技术从拟南芥cDNA文库中筛选GSNOR的互作蛋白,对300个样品测序后通过NCBI BLAST进行分析,其中有260个获得基因号,占总数的92.9％.通过TAIR网站查找基因号对应的蛋白序列,得到了105个蛋白.利用Blast2 GO进行GeneOntology注释显示互作蛋白参与4个生物进程,11个细胞组分,4个分子功能过程.对得到的可能互作蛋白随机挑选了5个进行互作蛋白的分离和回复验证,结果发现,随机挑选的这些蛋白的菌落在营养缺陷型的平板上能够正常生长,从而验证了这些蛋白均为GSNOR的互作蛋白.此次酵母双杂交文库的成功筛选为进一步研究番茄GSNOR的分子作用机制奠定了基础.