红球菌35R1中邻苯二酚1,2-双加氧酶的表达及纯化

• 作者: 何航航 姚霓红 吴菁 闫达中 晁红军
• 来源期刊: 武汉轻工大学学报
• 关键词: 3,5-二甲基苯酚 邻苯二酚 邻苯二酚1,2-双加氧酶 基因克隆 异源表达
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 科学研究|Science Research
• 页码范围: 20-23,72
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-7386.2021.03.004

摘要

3,5-二甲基苯酚(3,5-DMP)是一种重要的精细化工原料以及有机合成中间体,在工农业生产领域广泛应用并大量排放到环境中,对人类和环境造成了巨大的危害.Rhodococcus sp.35R1是一株以3,5-二甲基苯酚为唯一碳源和能源的高效降解菌.为验证菌株35R1中3,5-二甲基苯酚是通过邻苯二酚途径开环代谢的,通过生物信息学分析,寻找到35R1基因组上的邻苯二酚1,2-双加氧酶编码基因catA,通过一步克隆法将其连接到表达载体pET28a(+)上,然后,将其转化至表达宿主E.coli BL21(DE3)中,从而进行该基因的异源表达.结果成功在35R1基因组上扩增到catA基因,构建了重组质粒pET28a-catA,采用自诱导的方法诱导表达了邻苯二酚1,2-双加氧酶,纯化酶可催化邻苯二酚生成顺式粘糠酸.