假单胞菌HS-D36偏苯三酚1,2-双加氧酶克隆表达与催化特性研究

• 作者: 刘德立 李丹丹 李景龙 杨雪婷 熊丽 耿辉 袁永泽
• 来源期刊: 华中师范大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 对硝基苯酚 偏苯三酚1,2-双加氧酶 表达纯化 催化特性
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 页码范围: 758-762
• 页数: 5页
• 分类号: Q814.1
• 字数: 3230字
• 语种: 中文

摘要

由pnpC编码的偏苯三酚1,2-双加氧酶(Hydroxyquinol 1,2-dioxygenase,PnpC)是微生物分解硝基芳香族类环境污染物的关键酶.本研究从对硝基苯酚(p-nitrophenol,PNP)降解菌HS-D38(Pseudomohas sp.)中克隆pnpC基因,利用E.coli BL21 (DE3)高效表达重组PnpC,通过亲和色谱纯化并分析其催化特性.实验结果表明:HS-D36的pnpC开放阅读框长度为873 bp,编码290个氨基酸,酶蛋白相对分子量33 KD;20℃、异丙基硫代-β-半乳糖苷(Isopropyl β-D-1 thiogalactopy-ranoside,IPTG)诱导可高效表达重组PnpC;重组酶经Ni-NTA亲和色谱一步分离可达到电泳纯;纯酶比活力9.3 U/mg,纯化倍数37.2,活力收率23.8％;重组PnpC催化邻苯二酚开环反应的最适温度45℃、最适pH5.0;Lineweaver-Burk双倒数作图表明PnpC对邻苯二酚降解的米氏常数(Km)为21.95 mol/l、最大反应速度(Vmax)为2.68 mol/(min·mg);Fe3+、Cu2+、Fe2+和Zn2+对该酶具激活作用,Ni2+则显示抑制效应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	熊丽	华中师范大学生命科学学院	39	698	17.0	26.0
2	刘德立	华中师范大学生命科学学院	74	1006	18.0	29.0
3	杨雪婷	华中师范大学生命科学学院	4	21	3.0	4.0
4	袁永泽	华中师范大学生命科学学院	7	15	3.0	3.0
5	李丹丹	华中师范大学生命科学学院	10	19	2.0	4.0
6	耿辉	华中师范大学生命科学学院	6	5	1.0	2.0
7	李景龙	华中师范大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0