重组铜绿假单胞菌外膜蛋白D的原核表达与多克隆抗体制备研究

• 作者: 伍娜娜 刘祥 吴三桥 康超 荣娜 陈春琳 陈琛 马心怡
• 来源期刊: 河北农业大学学报
• 关键词: 铜绿假单胞菌 外膜蛋白OprD 多克隆抗体 诱导条件
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 页码范围: 99-105
• 页数: 7页
• 分类号: Q816
• 语种: 中文
• DOI: 10.13320/j.cnki.jauh.2019.0017

摘要

为获得铜绿假单胞菌外膜蛋白OprD并研究其分子功能.本研究采用分子克隆构建OprD蛋白重组表达菌株,用正交试验设计方法获得OprD菌株的最优表达条件和培养条件,通过SDS-PAGE切胶的方法纯化OprD蛋白,小鼠免疫制备OprD多克隆抗血清,蛋白质印迹法检测抗血清的特异性.使用DNAMan和MEGA软件对OprD蛋白进行同源性和系统发生分析.结果 表明,OprD重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果、OprD蛋白表达与纯化条带大小分别与预测相符.正交试验获得OprD菌株的最优培养条件为:葡萄糖浓度为0,转速230 r/min,装液量为50 mL;最优表达条件为:菌液OD600=0.8时加入终浓度为0.3 mmol/L的异丙基β-D1-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),37℃诱导12h.SDS-PAGE电泳切胶纯化获得纯度较高的OprD蛋白.蛋白质印迹法证实OprD蛋白抗血清具有较好的特异性.OprD蛋白序列系统发生分析发现,同菌属细菌存在较高的同源性,并且亲缘关系较近的细菌中OprD蛋白可能具有相似的分子功能.