重组结核分枝杆菌精氨酰tRNA合成酶活性验证及晶体生长

• 作者: 王炜 陈磊 陈明心 张岱 蒋露 任伟宏
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 关键词: 结核分枝杆菌 精氨酰tRNA合成酶 重组表达 结晶
• 年，卷（期）: 2021,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究|Experimental Studies
• 页码范围: 430-434,461
• 页数: 6页
• 分类号: R378.91
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2021.00.060

摘要

目的 建立重组结核分枝杆菌ArgRS的制备方法,并验证重组蛋白的生物活性.方法 将结核分枝杆菌Ar-gRS基因插入到pQE60质粒中,通过IPTG诱导表达重组蛋白,使用分子筛制备重组蛋白,并评价重组蛋白分子量.使用圆二色谱评价重组蛋白的折叠情况.通过Thermal Shift Assay进一步验证重组蛋白的生物活性.采用气相扩散法筛选晶体.结果 使用pQE60载体获得了重组表达的ArgRS蛋白.凝胶过滤层析纯化重组蛋白并验证了其分子量与天然蛋白一致;Thermal Shift Assay证明重组蛋白的生物活性.使用气相扩散法获得结核分枝杆菌ArgRS分子晶体.结论 成功制备出具有天然活性的重组结核分枝杆菌ArgRS蛋白,并获得蛋白质晶体.