GⅡ型诺如病毒装甲RNA质控品研制

• 作者: 宋士利 李明强 孙亚萍
• 来源期刊: 预防医学
• 关键词: GⅡ型诺如病毒 MS2噬菌体 装甲RNA 质控品
• 年，卷（期）: 2021,（5）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 536-540
• 页数: 5页
• 分类号: R373.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.19485/j.cnki.issn2096-5087.2021.05.027

摘要

目的 采用MS2噬菌体装甲RNA技术构建内含GⅡ型诺如病毒RNA的装甲RNA质控品,为诺如病毒核酸检测提供安全稳定的标准品.方法 将MS2噬菌体成熟酶蛋白、包膜蛋白和调节位点基因(PAC基因)及GⅡ型诺如病毒520 bp片段克隆到表达质粒pET30b中,构建重组质粒pET-PAC,pET-PAC转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行原核表达,表达产物纯化后鉴定并进行定量及稳定性分析.结果 研究成功构建和表达了耐RNA酶、内含GⅡ型诺如病毒片段的装甲RNA——AR-GⅡ.聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示AR-GⅡ病毒颗粒的蛋白分子量约为14.4 kD,纯化后的AR-GⅡ无宿主菌DNA、RNA等杂质残留,每1 mL LB培养基可诱导约1.5×1012 copies的AR-GⅡ.AR-GⅡ在37℃、4℃条件下可以稳定8周以上,-20℃反复冻融8次RNA病毒浓度也无明显衰减,稳定性良好.结论 基于MS2噬菌体制备的AR-GⅡ拷贝数高,稳定性好且能耐受RNA酶攻击,可以作为标准样品用于监控诺如病毒核酸提取、反转录和扩增等全过程.