多重荧光 RT-PCR同时检测GⅠ型和GⅡ型诺如病毒方法的建立

• 作者: 吴晓芳 徐德顺 查赟峰 沈月华 纪蕾 邱妤怡 陈莉萍 韩建康
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 诺如病毒 多重荧光RT-PCR 检测 GⅠ型 GⅡ型
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 311-315
• 分类号: R373.2
• 字数: 4013字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2011.04.011

摘要

目的 建立可同时检测GⅠ型和GⅡ型诺如病毒的双重荧光RT-PCR快速检测方法,并应用于临床标本的检测.方法 使用针对GⅠ型和GⅡ型诺如病毒各亚型代表株保守序列设计的特异性引物和TaqMan探针,通过调整引物、探针浓度优化最佳反应条件,建立一步法荧光RT-PCR快速检测反应体系.对该方法的灵敏度、特异性、稳定性进行评估,并对临床粪便标本进行检测,与已有的单重荧光RT-PCR方法进行比较.结果 实验结果表明,该检测方法特异性强,对GⅠ型、GⅡ型诺如病毒、轮状病毒、肠道腺病毒、甲型肝炎病毒进行检测,均无交叉反应;对GⅠ型和GⅡ型诺如病毒核酸的最低检出限分别可达1pg/mL和10pg/mL,并且重复性好;对101份临床标本分别用已有的单重荧光RT-PCR和本文建立的多重荧光RT-PCR进行检测,结果显示本文建立的多重荧光RT-PCR方法对GI型诺如病毒的检测能力优于前者.结论 本研究建立的多重荧光RT-PCR方法能同时对GⅠ型和GⅡ型诺如病毒进行快速检测,并且灵敏度高,特异性好,可用于感染性腹泻暴发中诺如病毒的快速检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈月华		26	58	4.0	6.0
2	徐德顺		59	129	6.0	9.0
3	查赟峰		21	53	4.0	7.0
4	韩建康		24	90	5.0	8.0
5	纪蕾		36	84	5.0	7.0
6	吴晓芳		48	85	5.0	7.0
7	陈莉萍		30	70	4.0	7.0
8	邱妤怡		1	19	1.0	1.0