miR-214-3p对缺糖缺氧再灌注诱导PC12细胞凋亡的作用及机制

• 作者: 郭冬芬 任真奎 胡玉梅 吴昌学 禹文峰
• 来源期刊: 贵州医科大学学报
• 关键词: 细胞凋亡 肾上腺嗜铬神经细胞瘤12细胞 缺糖缺氧再灌注 微小RNA214-3p B淋巴细胞瘤因子2样蛋白2 Bcl2-Associated X的蛋白质
• 年，卷（期）: 2021,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 766-772
• 页数: 7页
• 分类号: R34
• 语种: 中文
• DOI: 10.19367/j.cnki.2096-8388.2021.07.004

摘要

目的 探讨miR-214-3p对缺糖缺氧再灌注诱导PC12细胞凋亡的作用及机制.方法 利用数据库TargetScan 7.2预测miR-214-3p和B淋巴细胞瘤因子2样蛋白2(BCL2L2)之间的结合位点;选取人胚肾293T细胞共转染分为BCL2L2 mRNA 3′UTR野生型荧光素酶报告载体+miR-214-3p mimic(wt+mimic)组、BCL2L2 mR-NA 3′UTR野生型荧光素酶报告载体+mimic negative control(wt+NC)组、BCL2L2 mRNA 3′UTR突变型荧光素酶报告载体+miR-214-3p mimic(mut+mimic)组及BCL2L2 mRNA 3′UTR突变型荧光素酶报告载体+mimic NC(mut+NC组),检测4组293T细胞荧光素酶的发光活性;肾上腺嗜铬神经细胞瘤12(PC12)细胞转染miR-214-3p mimic(mimic组)、miR-214-3p mimic NC(mimic NC组)、miR-214-3p inhibitor(inhibitor组),miR-214-3p inhibitor NC(inhibitor NC组),采用蛋白免疫印迹法检测BCL2L2蛋白表达;PC12细胞作为对照(Control组),用缺氧缺糖(OGD/R)处理PC12细胞构建缺血再灌注细胞模型(OGD/R组),用miR-214-3p mimic转染PC12细胞,然后用OGD/R处理PC12细胞(OGD/R+mimic组),采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测Control组和OGD/R组miR-214-3p及BCL2L2 mRNA表达,采用蛋白免疫印迹法检测Control组、OGD/R组及OGD/R+mimic组裂解胱天蛋白水解酶3(Cleaved-caspase3)、B淋巴细胞瘤-2相关X(Bax)及B淋巴细胞瘤因子2(Bcl2)的蛋白表达.结果 数据库Targetscan 7.2预测结果表明,miR-214-3p与BCL2L2的3′UTR区之间存在结合位点;荧光素酶报告基因实验结果表明,wt+mimic组荧光素酶活性低于wt+NC组,mut+mimic组和mut+NC中荧光素酶活性无明显差异;mimic NC组BCL2L2的蛋白表达高于mimic组,inhibitor NC组BCL2L2的蛋白表达低于inhibitor组(P<0.05);与Control组比较,OGD/R组PC12细胞中BCL2L2 mRNA和蛋白表达水平降低、miR-214-3p mRNA表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);OGD/R组Cleaved-caspase-3和Bax表达分别高于Control组、低于OGD/R+mimic组,但Bcl2表达分别低于Control组、高于OGD/R+mimic组(P<0.05).结论 过表达miR-214-3p可靶向结合并下调BCL2L2的表达,从而加速PC12细胞的凋亡.