大肠杆菌氨基转移酶的非天然氨基酸底物特异性研究

• 作者: 何婷 倪雪晨 张萍萍 陈茹 宋晶晶 雷佳 王行国
• 来源期刊: 湖北大学学报（自然科学版）
• 关键词: 氨基转移酶 非天然氨基酸 易错PCR 底物特异性 最适温度
• 年，卷（期）: 2021,（4）
• 所属期刊栏目: 微生物学技术与实验研究专栏
• 页码范围: 377-384,470
• 页数: 9页
• 分类号: Q93-33
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2375.2021.04.003

摘要

氨基转移酶催化L-氨基酸和α-酮酸之间的氨基转移.TLC(薄层层析)和甲臜颜色反应检测大肠杆菌4种氨基转移酶(TyrAT、IlvAT、AspAT和AvtAT)催化6种非天然氨基酸的转氨活性,发现AvtAT和AspAT无非天然氨基酸转氨活性.TyrAT能催化DL-高苯丙氨酸、L-正亮氨酸和L-正缬氨酸的转氨反应,而IlvAT则催化DL-高苯丙氨酸、L-正缬氨酸、L-正亮氨酸、L-叔亮氨酸和L-新戊基甘氨酸的氨基转移.使用易错PCR突变和DL-高苯丙氨酸/L-正亮氨酸作氮源定向进化筛选,获得10个不同位点突变的TyrAT突变酶.酶活分析发现,这些突变酶虽酶活不同但尚未扩展TyrAT的非天然氨基酸底物特异性.10个突变酶中,每个酶蛋白210位都出现Cys替换Phe.与野生型酶比较,TyrAT的F210C突变明显改变酶的催化最适温度并且提高酶在37℃的催化效率.