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人血管内皮细胞上与2型登革病毒相互作用蛋白的筛选与鉴定
人血管内皮细胞上与2型登革病毒相互作用蛋白的筛选与鉴定
作者:
杨杰
饶贤才
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
登革病毒
VOPBA/2D-VOPBA
人血管内皮细胞
Actin
Vimentin
摘要:
目的 建立高效病毒受体筛选方法,筛选并鉴定人血管内皮细胞膜上与2型登革病毒(DENV-2)相互作用的蛋白.方法 用纯化的DENV-2 E蛋白DⅢ区(EDⅢ)分子代替全病毒颗粒与转印至PVDF膜的人血管内皮ECV304细胞膜蛋白进行孵育,建立改良的VOPBA和2D-VOPBA技术筛选相互作用蛋白,筛选出的候选蛋白经质谱分析、Western blot和免疫共沉淀(Co-IP)实验鉴定;利用抗体阻断实验和激光共聚焦显微技术观察和验证候选蛋白与DENV-2感染的关系;经生物信息学分析,预测候选蛋白与DENV-2 EDⅢ蛋白的对接复合物模型及其结合热点残基.结果 筛选出相对分子质量34 000、43 000和55 000这3个候选蛋白,其中相对分子质量43 000和55 000蛋白经鉴定分别为细胞骨架微丝蛋白(fibrous-actin,F-actin)和波形蛋白(vimentin),均可与DENV-2 EDⅢ蛋白在体外发生特异性结合,并且vimentin蛋白可表达于人血管内皮细胞表面,其抗体可部分阻断DENV-2感染;激光共聚焦显微镜观察到在DENV-2感染的前5 min就可引起ECV304细胞中actin的重排,并且actin与病毒E蛋白有明显的随感染时间增强的共存现象.最后,利用生物信息学分别预测了actin和vimentin与DENV-2 EDⅢ蛋白的结合模型及结合残基.结论 成功建立了高效的病毒受体筛选技术,并证实筛选到的actin和vimentin蛋白可作为辅助受体或相互作用蛋白,通过与DENV-2 EDⅢ蛋白结合参与DENV-2感染人血管内皮细胞.
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篇名
人血管内皮细胞上与2型登革病毒相互作用蛋白的筛选与鉴定
来源期刊
免疫学杂志
学科
关键词
登革病毒
VOPBA/2D-VOPBA
人血管内皮细胞
Actin
Vimentin
年,卷(期)
2021,(1)
所属期刊栏目
技术与方法|Research Articles
研究方向
页码范围
79-87
页数
9页
分类号
R373
字数
语种
中文
DOI
10.13431/j.cnki.immunol.j.20210012
五维指标
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研究主题发展历程
节点文献
登革病毒
VOPBA/2D-VOPBA
人血管内皮细胞
Actin
Vimentin
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
免疫学杂志
主办单位:
第三军医大学
中国免疫学会
出版周期:
月刊
ISSN:
1000-8861
CN:
51-1332/R
开本:
大16开
出版地:
重庆市沙坪坝区高滩岩
邮发代号:
78-32
创刊时间:
1985
语种:
chi
出版文献量(篇)
4652
总下载数(次)
25
总被引数(次)
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