人-人嵌合抗丙肝抗体检测阳性对照品的研制及应用

• 作者: 李天宁 邵艳宏 朱浩 王文皓 刘运德 袁玉华
• 来源期刊: 天津医科大学学报
• 关键词: 丙型肝炎病毒抗体 噬菌体展示 对照品
• 年，卷（期）: 2021,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 180-184
• 页数: 5页
• 分类号: R446
• 语种: 中文

摘要

目的:获得人-人嵌合型抗丙肝抗体的阳性对照品.方法:采集20例具有高抗体滴度的抗丙肝抗体阳性患者外周血,混合后分离外周血单个核细胞,TRIzol提取总RNA,逆转录合成cDNA.PCR分别扩增重链可变区和轻链可变区并以其为模板,获得ScFv,导入到PCANTAB 5E载体上构建噬菌体展示库.分别用NS3、NS4、NS5和core抗原对噬菌体库进行5轮的富集和淘洗;通过Phage ELISA的方法对单克隆菌落进行特异性鉴定,分别获得抗丙肝NS3、NS4、NS5抗体和两个抗丙肝core抗体.将ScFv的VH和VL分别克隆到pcDNA3.4载体上,构建人IgG全长抗体并通过Lipo3000转染293T细胞.收集细胞上清,经protein A纯化,保存于-80℃.结果:成功构建了抗丙肝抗体噬菌体库;筛选并表达了5个分别针对NS3、NS4、NS5和core抗原的阳性抗体,经验证表达的抗丙肝阳性抗体在-20℃C～37℃C表现稳定.多次重复冻融后不会影响抗体的使用效果.且5种抗体在国内外多种丙型肝炎检测试剂盒间测试均为阳性,具备一定的通用性.结论:获得5种人-人嵌合型抗丙肝抗体的阳性对照品且适用于多种丙型肝炎检测试剂盒.