布鲁顿酪氨酸激酶在内毒素/脂多糖诱导烫伤小鼠肠道细胞焦亡中的作用

• 作者: 金煦 万佳 段淑芳 龚裕州 王飞 陈旭林
• 来源期刊: 中华烧伤杂志
• 关键词: 烧伤 脓毒症 细胞焦亡 肠道损伤 布鲁顿酪氨酸激酶
• 年，卷（期）: 2021,（6）
• 所属期刊栏目: 论著·烧伤感染
• 页码范围: 546-554
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn501120-20210119-00027

摘要

目的:探讨布鲁顿酪氨酸激酶（BTK）在内毒素/脂多糖（LPS）诱导烫伤小鼠肠道细胞焦亡中的作用。方法:采用实验研究方法。将128只6~8周龄的雄性C57BL/6小鼠分成假伤组、单纯烫伤组、烫伤+LPS组、烫伤+LPS+3 mg/kg LFM-A13组、烫伤+LPS+10 mg/kg LFM-A13组、烫伤+LPS+30 mg/kg LFM-A13组，假伤组8只，其余5组分别为24只。烫伤5组小鼠造成背部10%体表总面积Ⅲ度烫伤，假伤组小鼠背部模拟致伤。伤后0 h（即刻），假伤组、单纯烫伤组小鼠腹腔注射生理盐水，烫伤+LPS组小鼠腹腔注射LPS，其余3组小鼠腹腔注射LPS及相应剂量的LFM-A13。假伤组小鼠于伤后0 h处死，收集肠道组织和血清；烫伤5组分别于伤后0、12、24 h，每组取8只小鼠处死，收集肠道组织及伤后12 h血清。采用免疫组织化学法检测小鼠肠道组织BTK磷酸化情况。采用蛋白质印迹法检测小鼠肠道组织磷酸化BTK和剪切型胱天蛋白酶1（caspase-1）、caspase-11蛋白表达情况。采用酶联免疫吸附测定法检测小鼠肠道组织和血清白细胞介素1β（IL-1β）含量。对数据行单因素方差分析、LSD检验。结果:6组小鼠伤后0 h及单纯烫伤组小鼠伤后12、24 h肠道组织未见明显BTK磷酸化情况。伤后12、24 h，烫伤+LPS组小鼠肠道组织BTK磷酸化较单纯烫伤组明显增加，烫伤+LPS+3 mg/kg LFM-A13组、烫伤+LPS+10 mg/kg LFM-A13组、烫伤+LPS+30 mg/kg LFM-A13组小鼠肠道组织BTK磷酸化较烫伤+LPS组明显下降，且随着LFM-A13剂量的增加，下降程度逐渐增加。与假伤组（0.130±0.010）及单纯烫伤组（0.120±0.040、0.110±0.040）比较，烫伤+LPS组小鼠伤后12、24 h肠道组织磷酸化BTK蛋白表达明显升高（0.470±0.090、0.430±0.080， P<0.01）。与烫伤+LPS组比较，烫伤+LPS+3 mg/kg LFM-A13组小鼠伤后24 h及烫伤+LPS+10 mg/kg LFM-A13组、烫伤+LPS+30 mg/kg LFM-A13组小鼠伤后12、24 h肠道组织磷酸化BTK蛋白表达明显下降（0.280±0.060，0.300±0.120、0.150±0.050，0.280±0.090、0.140±0.040， P<0.05或 P<0.01）。与烫伤+LPS+3 mg/kg LFM-A13组比较，烫伤+LPS+10 mg/kg LFM-A13组、烫伤+LPS+30 mg/kg LFM-A13组小鼠伤后24 h肠道组织磷酸化BTK蛋白表达明显下降（ P<0.01）。与假伤组和单纯烫伤组比较，烫伤+LPS组小鼠伤后12、24 h肠道组织剪切型caspase-1、caspase-11蛋白表达明显增加（ P<0.01）。与烫伤+LPS组比较，烫伤+LPS+3 mg/kg LFM-A13组小鼠肠道组织伤后12 h剪切型caspase-1和伤后12、24 h剪切型caspase-11蛋白表达及烫伤+LPS+10 mg/kg LFM-A13组、烫伤+LPS+30 mg/kg LFM-A13组小鼠伤后12、24 h肠道组织剪切型caspase-1、caspase-11蛋白表达明显减少（ P<0.01）。与烫伤+LPS+3 mg/kg LFM-A13组比较，烫伤+LPS+10 mg/kg LFM-A13组、烫伤+LPS+30 mg/kg LFM-A13组小鼠伤后12、24 h肠道组织剪切型caspase-1、caspase-11蛋白表达明显减少（ P<0.05或 P<0.01）。伤后12 h，烫伤+LPS组小鼠肠道组织、血清IL-1β含量明显高于假伤组和单纯烫伤组（ P<0.01），烫伤+LPS+30 mg/kg LFM-A13组小鼠肠道组织、血清IL-1β含量明显低于烫伤+LPS组（ P<0.01）。 结论:BTK的磷酸化与烫伤脓毒症小鼠肠道组织剪切型caspase-1、caspase-11和血清、肠道的IL-1β含量增加有关。BTK的磷酸化介导了LPS诱导的烫伤小鼠肠道细胞焦亡，抑制BTK磷酸化可减轻烫伤小鼠肠道细胞焦亡，对肠道具有保护作用。