miR-146a-3p靶向TLR4减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤

• 作者: 徐晓荣 王海滨 白晓月 苏新云 郭冉
• 来源期刊: 中国呼吸与危重监护杂志
• 关键词: 急性肺损伤 miR-146a-3p Toll样受体4 炎症反应
• 年，卷（期）: 2021,（7）
• 所属期刊栏目: 急性呼吸窘迫综合征/急性肺损伤|Acute respiratory distress syndrome/Acute lung injury
• 页码范围: 495-502
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.7507/1671-6205.202005034

摘要

目的 研究微小RNA (miR)-146a-3p对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)和炎症反应的作用及机制.方法 将32只BALB/c小鼠随机分为假手术组、ALI组、ALI+agomiR-阴性对照(NC)组以及ALI+miR-146a-3p激动剂组(ALI+agomiR-146a-3p组),每组8只.通过气管将5 mg/kg LPS滴入肺中以建立ALI模型,假手术组缓慢滴注等量生理盐水.ALI+agomiR-146a-3p组/NC组小鼠尾静脉注射8 mg/kg agomiR-146a-3p或agomiR-NC,1次/d,持续3d.假手术组和模型组给予尾静脉注射等量生理盐水.24 h后处死并收集肺组织.RT-qPCR检测肺组织中miR-146a-3p和Toll样受体4(TLR4)mRNA的表达,蛋白印迹检测肺组织中TLR4、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白的表达水平,苏木精-伊红染色观察肺组织病理变化,原位末端转移酶标记法检测肺组织细胞凋亡情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平.双荧光素酶报告系统验证MRC-5细胞中miR-146a-3p和TLR4的靶向关系.将人正常肺细胞MRC-5分为对照组、LPS组、LPS+miR-146a-3p mimic组、LPS+pcDNA3.1 (pc)-TLR4组、LPS+miR-146a-3pmimic+pc-TLR4组.将100 nmol/L的miR-146a-3p mimic、pc-TLR4质粒分别或联合转染进入MRC-5细胞24 h后,用1000 ng/mL的LPS或生理盐水处理72 h.流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白印迹检测TLR4、活化的caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白的表达水平,ELISA检测IL-1β、IL-6和TNF-α水平.结果 与ALI组相比,ALI+agomiR-146a-3p组小鼠肺组织中miR-146a-3p表达上调,而TLR4 mRNA和蛋白表达均下调,肺组织细胞凋亡率减少,活化的caspase-3和Bax蛋白表达下调,而Bcl-2蛋白表达上调,肺组织中TNF-α、IL-6和IL-1β含量减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).双荧光素酶报告基因实验证实miR-146a-3p通过靶向TLR43'UTR序列调控其转录(P＜0.05).与LPS组相比,LPS+miR-146a-3pmimic组MRC-5细胞中TLR4蛋白表达下调,细胞凋亡减少,活化的caspase-3和Bax蛋白表达下调,TNF-α、IL-6和IL-1β含量减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).过表达TLR4可逆转miR-146a-3pmimic过表达对LPS诱导的MRC-5细胞凋亡和炎症反应的作用(P＜0.05).结论 miR-146a-3p通过靶向下调TLR4缓解LPS诱导的小鼠ALI.