基于截短型Cap蛋白的猪圆环病毒3型间接ELISA检测方法的建立

• 作者: 郭钱菊 查云峰 陈永杰 钟文霞 高奎鹏 皮墨霖 宁章勇
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 关键词: 猪圆环病毒3型 Cap蛋白 原核表达 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2021,（8）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 970-975
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0125

摘要

为建立猪圆环病毒3型(PCV3)的血清学诊断方法,本研究构建了去除核定位序列的截短型Cap蛋白重组质粒,并进行了原核表达,纯化的重组蛋白经SDS-PAGE及Western-blot确认后,将其作为包被抗原,建立了PCV3抗体检测的间接ELISA方法.SDS-PAGE结果显示,表达的Cap重组蛋白约为39 ku,Western-blot结果表明,重组蛋白具有良好的反应原性.通过方阵滴定法确定了最佳抗原包被浓度为10 μg/mL,最佳血清稀释度为1∶20,当血清样本D450≥0.301时,可判为PCV3抗体阳性.该方法特异性强,仅与PCV3阳性血清发生特异性反应.该方法敏感性好,对1:240稀释的血清仍可检出阳性;该方法重复性好,批内和批间试验的变异系数分别为1.24％～3.70％和3.25％～7.28％.用建立的间接ELISA方法对72份临床猪血清进行检测,检出阳性血清22份.结果 表明,基于截短型Cap蛋白建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性及重复性,检测方法稳定可靠,为临床PCV3血清学诊断提供了一种稳定可靠的技术手段,也为PCV3流行病学调查提供了有效技术支撑.