人狂犬病病毒抗体ELISA定量检测方法的建立

• 作者: 卞论 赵卉 贾庆钊 方浩霖 何春辉 叶珂 林冠峰 吴英松
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 关键词: 狂犬病病毒 酶联免疫吸附试验 抗体检测 免疫效果
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 330-334
• 页数: 5页
• 分类号: R373.9|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 建立人狂犬病病毒抗体ELISA定量检测方法,用于评价人用狂犬病疫苗的免疫效果.方法 将抗狂犬病病毒单克隆抗体(S010)包被酶标板,加入1 ∶ 100稀释的狂犬病病毒灭活全病毒孵育1 h,加入标准品与HRP标记的抗人IgG孵育1.5 h,显色并检测,建立检测狂犬病病毒抗体的ELISA方法,确定该方法空白限,并进行准确度、精密度验证.用建立的ELISA方法及快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)对62份阳性血清进行检测,比较相关性.结果 捕获抗体最佳包被浓度为3.5 μg/mL,酶标抗体最佳稀释度为1∶10 000;样品浓度与信号值具有良好的线性关系,r2＞0.99.该方法检测空白限为0.03 IU/mL;两个不同浓度(1.23和3.12 IU/mL)血清样本检测回收率分别为89.6％和92.6％;两个不同浓度(5和2.5 IU/mL)自制质控品分析内和分析间变异系数分别为13.9％、14.3％和11.5％、13.2％.建立的ELISA方法检测结果与RFFIT法检测结果相关性良好,R2=0.712.结论 建立的人狂犬病病毒抗体ELISA定量检测方法充实了人用狂犬病疫苗免疫效果的检测技术,有望用于疫苗免疫效果的初步评估.