辣椒组织总RNA两种提取方法比较及qRT-PCR验证

• 作者: 牛西强 罗潇云 胡能兵 黄先忠
• 来源期刊: 安徽科技学院学报
• 学科: 农学
• 关键词: 辣椒 总RNA 基因表达 qRT-PCR 自我修剪基因
• 年，卷（期）: 2021,（6）
• 所属期刊栏目: 植物科学|Plant Science
• 页码范围: 42-47
• 页数: 6页
• 分类号: S641.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.19608/j.cnki.1673-8772.2017.0918

摘要

目的:探索提取高质量的辣椒不同组织总RNA的方法,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术验证.方法:以1年生辣椒(Capsicum annuum)的根、下胚轴、茎、叶、顶端分生组织、花和果实为实验材料,比较改良Trizol Reagent试剂法和RNAprep Pure试剂盒法对辣椒组织总RNA的提取效果.以改良Trizol Reagent试剂法提取的辣椒不同组织总RNA为模板,反转录成cDNA的第一条链;通过RT-PCR和qRT-PCR,研究甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GA PD H)的扩增和自我修剪基因(SELF-PRUNING,CaSP)的组织表达.结果:Trizol Reagent提取的总RNA,28 S和18 S条带较亮,OD260/OD280比值为1.82～2.07;RNAprep Pure提取的总RNA,28 S和18 S条带较暗,OD260/OD280比值为1.93～2.15;Trizol Reagent提取的总RNA能扩增出CaGA PDH基因片段,目的基因CaSP在不同组织中表达水平不同,在根和花中表达更高.结论:Trizol Reagent提取的总RNA,完整性和纯度均较好,得率也较高,能满足后续的分子实验要求.T rizol Reagent试剂法是提取高质量辣椒不同组织总RN A的较好方法.