结核分枝杆菌异烟肼耐药基因(katG)调控蛋白的表达

• 作者: 袁薇 陈旭 赵兵兵 魏川川 许士池 刘英
• 来源期刊: 医学动物防制
• 关键词: 结核分枝杆菌 基因克隆 katG基因 二元信号转导系统 蛋白表达 耐药
• 年，卷（期）: 2021,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究|Experimental Research
• 页码范围: 374-377
• 页数: 4页
• 分类号: R378.91+1
• 语种: 中文
• DOI: 10.7629/yxdwfz202104016

摘要

目的 katG基因表达异常对一线抗痨药物异烟肼的耐药性意义重大,克隆并表达结核分枝杆菌katG基因的调控蛋白—furA、katG、senX3和regX3,有助于探讨其耐药机制.方法 以结核分枝杆菌标准菌株H37Rv基因组DNA序列为模板,设计furA、katG、senX3和regX3四种基因的特异性引物,分别进行PCR扩增,获得目的基因,通过克隆载体pMD19-T构建重组质粒,转化EcoliDH5α,经DNA测序并与Gen Bank进行比对分析验证,质粒酶切后再亚克隆到表达载体pET42a(+),转化BL21(DE3)中,IPTG诱导重组目的蛋白表达,SDS-PAGE电泳分析重组蛋白大小,Western Blot鉴定表达情况.结果 PCR扩增出furA、katG、senX3和regX3基因,成功构建重组质粒pET42a(+)-furA、pET42a(+)-katG、pET42a(+)-senX3、pET42a(+)-regX3,0.5 mmol/L IPTG 诱导表达重组蛋白,经 SDS-PAGE 电泳和 Western Blot 验证,furA重组蛋白在23KD、regX3重组蛋白在28KD、senX3重组蛋白在46 KD和katG重组蛋白在80 KD处分别出现蛋白条带,重组蛋白主要以可溶形式表达.结论 应用分子生物学技术成功构建furA、katG、senX3和regX3基因原核表达系统,并获得相应重组蛋白,为进一步研究其结构和功能,探讨以katG为核心的异烟肼耐药机制奠定基础.