梅毒螺旋体Hsp40蛋白的表达、纯化及免疫学活性分析

• 作者: 伍仙 何树光
• 来源期刊: 中国病原生物学杂志
• 关键词: 梅毒螺旋体 Hsp40蛋白 表达纯化 免疫学活性
• 年，卷（期）: 2021,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究|EXPERIMENTAL STUDY
• 页码范围: 676-680
• 页数: 5页
• 分类号: R377
• 语种: 中文
• DOI: 10.13350/j.cjpb.210612

摘要

目的 表达梅毒螺旋体(Tp) Hsp40蛋白并分析其免疫学活性.方法 利用软件预测TpHsp40蛋白的B细胞表位,构建重组质粒pET28a-TpHsp40,转化大肠埃希菌BL21 star(DE3),培养后利用IPTG诱导重组TpHsp40蛋白的表达.收集菌体,破碎、离心后用Ni2+层析柱进行纯化.收集80、120和200 mmol/L咪唑洗脱蛋白,经脱盐、去内毒素后取纯度良好的一组TpHsp40蛋白免疫小鼠,制备抗血清,采用ELISA检测抗体效价并分型.取小鼠脾脏,制成脾细胞悬液,采用CCK-8法检测淋巴细胞增殖情况,ELISA法测定淋巴细胞分泌的细胞因子水平.结果 生物信息学分析TpHsp40含有多个B细胞表位.构建的重组质粒转染DE3后经IPTG诱导表达分子质量单位约为42.4 ku的重组TpHsp40蛋白,经亲和层析纯化后免疫小鼠,能够刺激产生高滴度(105log10)的血清抗体.且能够诱导小鼠淋巴细胞增殖(SI值为2.41)和IFN γ、TNF-α高表达,但不能够诱导Th2型细胞因子表达.结论 重组表达的梅毒螺旋体TpHsp40蛋白能够诱导小鼠产生Th1型应答,有望成为Tp疫苗的新靶点.