LncRNA人浆细胞瘤变体易位1介导miR-148b调控脂多糖诱导巨噬细胞自噬的机制研究

• 作者: 曹蔚堂 王文欣
• 来源期刊: 医学研究生学报
• 关键词: 脓毒症 LncRNA人浆细胞瘤变体易位1 miR-148b 脂多糖 巨噬细胞 自噬
• 年，卷（期）: 2021,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究|Basic Research
• 页码范围: 698-705
• 页数: 8页
• 分类号: R-33
• 语种: 中文
• DOI: 10.16571/j.cnki.1008-8199.2021.07.005

摘要

目的 目前LncRNA人浆细胞瘤变体易位1(LncRNA-PVT1)在脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞自噬的相关机制尚不清楚.文章旨在探讨LncRNA-PVT1介导miR-148b对LPS诱导的巨噬细胞自噬的相关机制.方法 体外培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7,LPS刺激并分别转染PVT1 siRNA、miR-148b mimics、PVT1,分为LPS组(细胞不进行转染)、LPS+si-NC组(转染PVT1质粒阴性对照)、LPS+PVT1 siRNA转染组(转染PVT1 siRNA质粒)、LPS+miR-NC组(转染miR-148b mimics阴性对照)、LPS+miR-148b mimics组(转染miR-148b mimics)、LPS+PVT1-NC+miR-148b mimics组(转染PVT1阴性对照和miR-148b mimics)、LPS+PVT1+miR-148b mimics组(转染PVT1和miR-148b mimics).同时设置空白组,空白组RAW264.7细胞既不进行LPS处理也不进行转染.采用qRT-PCR检测细胞中LncRNA-PVT1、miR-148b的表达;CCK-8检测细胞活力;免疫荧光染色检测细胞中LC3的表达;ELISA检测细胞中炎症因子水平;双荧光素酶报告系统分析PVT1与miR-148b的靶向关系;蛋白免疫印迹法检测细胞中自噬蛋白表达.结果 与空白组比较,LPS组PVT1 mRNA、LC3阳性表达、LC3-II/LC3-I、Beclin-1、TNF-α、IL-6水平显著升高(P<0.05),miR-148b、p62表达显著降低(P<0.05).与LPS组、LPS+si-NC组比较,LPS+PVT1 siRNA组PVT1 mRNA、p62、TNF-α、IL-6水平显著降低(P<0.05),miR-148b、LC3阳性表达、LC3-II/LC3-I、Beclin-1表达显著升高(P<0.05).CCK-8实验结果显示,与空白组细胞活力(100.00±0.00)比较,LPS组(73.46±3.25)显著降低(P<0.05);与LPS组细胞活力(73.46±3.25)、LPS+si-NC组(74.15±4.42)比较,LPS+PVT1 siRNA组(90.38±2.16)显著升高(P<0.05).双荧光素酶报告基因结果表明,PVT1与miR-148b存在靶向关系.与LPS组、LPS+miR-NC组比较,LPS+miR-148b mimics组LC3阳性表达、LC3-II/LC3-I、Beclin-1表达显著上调(P<0.05),p62、TNF-α、IL-6水平显著下调(P<0.05);与LPS+miR-148b mimics组、LPS+PVT1-NC+miR-148b mimics组比较,LPS+PVT1+miR-148b mimics组细胞LC3-II/LC3-I、Beclin-1表达显著下调(P<0.05),p62、TNF-α、IL-6水平显著上调(P<0.05).结论 脓毒症中LncRNA-PVT1靶向miR-148b抑制巨噬细胞自噬,PVT1可能是脓毒症治疗的潜在研究靶点.