斑马鱼notch1a对pka报告基因转录调控作用

• 作者: 张颖 季策 任建峰 李伟眀 张庆华
• 来源期刊: 中国骨质疏松杂志
• 关键词: 斑马鱼 骨质疏松 notch1a pka 双荧光素酶报告基因
• 年，卷（期）: 2021,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 502-507
• 页数: 6页
• 分类号: Q71
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-7108.2021.04.008

摘要

目的 通过双荧光素酶报告基因研究斑马鱼notch1a对pka的转录调控作用.方法 利用NCBI数据库获得斑马鱼notch1a基因序列,克隆notch1a基因的胞内段NICD(Notch intracellular domain),构建pCMV-N1aICD表达载体,利用蛋白质印迹法检测N1aICD蛋白的表达水平;利用加州大学圣克鲁兹分校基因组浏览器数据库获得斑马鱼pka基因的启动子序列,构建pGL3-pka报告基因载体,然后在HEK293T细胞系中证实构建的报告基因载体具有活性;将重组荧光素酶报告载体和N1aICD表达载体共转染HEK293T细胞,用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性,验证notch1a胞内段对pka基因转录水平的调控作用.结果 经测序验证克隆成功后,蛋白质印迹法检测N1aICD蛋白能够正常表达,且蛋白大小与预测结果一致.双荧光素酶报告基因显示,pGL3-pka组活性为pGL3空载组的3.25倍.转染pGL3-pka和pCMV-N1aICD组活性为转染pGL3-pka和pCMV空载对照组的0.31倍.结论 斑马鱼notch1a对pka启动子具有转录抑制作用.在骨形成和骨重建中,Notch通路可能通过调控pka来参与成骨与破骨细胞的分化.