猪瘟野毒株与疫苗株双重TapMan实时定量PCR方法的建立与应用

• 作者: 朱丽珂 房永祥 李皖豫 刘娟 高真贞 贾怀杰 何小兵 陈国华 娄忠子 李维克 景志忠
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪瘟病毒 疫苗株 TapMan探针 双重实时定量PCR
• 年，卷（期）: 2021,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1475-1481
• 页数: 7页
• 分类号: S852.651
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0207

摘要

为实现对猪瘟野毒株与疫苗株之间的快速鉴别,本试验建立了 一种猪瘟野毒株与疫苗株的双重TapMan实时定量PCR的检测方法.通过对GenBank公布的猪瘟病毒野毒株及疫苗株的全基因组序列进行比对和分析,设计出2对特异性引物及2条TapMan探针,经反应体系及反应条件优化后,对其特异性、稳定性及敏感性进行了验证.结果显示,本方法能特异性地对猪瘟野毒株及疫苗株进行鉴别检测,并且不与其他常见的猪源病毒产生交叉反应,组内和组间检测变异系数均小于1％,敏感性较普通RT-PCR分别高出100倍和1 000倍以上,且野毒株与疫苗株的最低检测下限分别在1.3 copies/μL和1.58 copies/μL.应用本方法对实验室保存的甘肃某猪场猪瘟活疫苗免疫前、后的56份已知背景的样本进行检测,结果,阳性符合率高达100％.本方法特异性强,稳定性和灵敏度高,不仅能够准确定量,并且可快速地对同一个样品中猪瘟病毒野毒株、疫苗毒株进行检测,为后续猪瘟净化效果的评估提供了新的技术手段.