胎羊与成年绵羊原代肝细胞的分离培养与鉴定

• 作者: 邹东敏 刘若楠 李睿文 刘茂军 段智变 马玉忠
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 绵羊 原代肝细胞 分离培养 鉴定
• 年，卷（期）: 2021,（11）
• 所属期刊栏目: 临床兽医学
• 页码范围: 1462-1467
• 页数: 6页
• 分类号: S852
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0176

摘要

为了获得稳定、可持续传代的绵羊肝细胞,采集110～120 d的绵羊胚胎肝和正常未怀孕成年绵羊肝,用胶原酶两步灌流法分离肝细胞;用PAS染色法和CK-18免疫荧光法鉴定细胞;用CCK-8测定肝细胞第6、12、24、36、48、60、72和96小时的D450值,绘制生长曲线.结果 显示,获得的绵羊原代肝细胞形态完整,贴壁良好,平均存活率为92％.PAS和CK-18荧光染色呈阳性,肝细胞纯度在95％以上.胎羊原代肝细胞可传代,成年绵羊肝细胞不可传代.由以上结果可知,将经典的Seglen两步原位胶原酶灌流法进行优化改良,可获得大量高纯度、高活性的绵羊原代肝细胞,胎羊肝细胞具有良好的活性,可满足需要大量肝细胞的体外试验研究.