转基因番木瓜基因组DNA的快速制备和PCR检测方法

• 作者: 潘志文 陈伟庭 高洁儿 周峰 姚涓 王声斌 姜大刚
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 转基因番木瓜 DNA制备 PCR 检测方法
• 年，卷（期）: 2021,（6）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 286-294
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2020-1587

摘要

转基因番木瓜检测中,模板DNA的制备是关键一步.为了提高检测效率,建立快速制备番木瓜样品基因组DNA和PCR检测方法十分重要.建立了番木瓜基因组DNA的快速制备方法,包括样品准备、制备缓冲液匀浆和稀释上清.在完成不同番木瓜样品的基因组DNA快速制备后,对获得的DNA进行PCR检测验证.普通PCR验证结果显示,本方法制备的叶片和果肉基因组DNA溶液稀释5倍时,PCR扩增条带清晰,更高稀释倍数时,叶片基因组DNA扩增条带强于果肉基因组DNA;实时荧光PCR验证结果显示,叶片基因组DNA的PCR扩增效率位于合理区间.灵敏度测试结果表明,含量低至0.1％的叶片和果肉样品,内标准基因和外源基因特异性片段普通PCR和实时荧光PCR均能得到预期扩增,且重复性较好.本研究建立的番木瓜基因组DNA快速制备与PCR方法效果良好,体系稳定.