H1N1型流感病毒血凝素蛋白胞外段的真核表达及免疫原性分析

• 作者: 刘京 年悬悬 龚铮 吕传硕 邓涛 马宁 周蓉 张国梅 乐洋 张哲罡 刘博 张家友 李妍玲 王鹏飞 杨晓明
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 流感病毒 血凝素 胞外段 真核表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2021,（12）
• 所属期刊栏目: 疫苗研究
• 页码范围: 1401-1405,1411
• 页数: 6页
• 分类号: Q786|R392
• 语种: 中文

摘要

目的 真核表达H1N1型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白胞外段,并分析其免疫原性.方法 以H1N1型流感毒株基因组为参考序列,将H1N1 HA的胞外段氨基酸序列进行密码子优化后基因合成,将合成的目的 基因片段与KS001载体连接,构建重组质粒KS001/HA,转染至Expi293F真核细胞,收集表达产物,进行12％ SDS-PAGE、Western blot及N-糖基化鉴定;将表达产物经Capto Q离子交换层析柱纯化,收集纯化产物进行12％ SDS-PAGE鉴定,BCA法测定蛋白浓度;用不同浓度的HA胞外段蛋白辅以佐剂免疫小鼠,通过病毒微量中和试验(mi-croneutralization test,MNT)检测小鼠血清抗体效价.结果 经菌液PCR、双酶切及测序鉴定证明质粒构建正确;表达的重组蛋白以单体形式存在,相对分子质量约70000,N-糖基化丰富;重组蛋白与佐剂配伍后的各剂量组均产生针对H1N1型病毒特异性抗体,且阳转率≥90％.结论 成功构建了重组质粒KS001/HA,并于真核细胞中表达,表达产物联合佐剂免疫小鼠后具有较好的免疫原性.