稳定表达PRRSV N蛋白的Marc-145细胞系的构建

• 作者: 任同伟 覃念 全东群 谢欣 王豪 王玉旭 陈樱 欧阳康 黄伟坚 韦祖樟
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: PRRSV N蛋白 细胞系 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文|Research articles
• 页码范围: 15-19
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文

摘要

为了构建稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白的Marc-145细胞系,以PRRSV全长感染性克隆为模板,通过PCR方法扩增PRRSV N基因,将N基因克隆到慢病毒载体中,获得重组质粒pLenti-CMV-N,利用三质粒慢病毒包装系统转染293T细胞,包装成表达N蛋白的慢病毒颗粒,将慢病毒颗粒转导至Marc-145细胞,用潮霉素B初步筛选阳性细胞,采用终点稀释的方法筛选出稳定表达PRRSV N蛋白的Marc-145细胞系.通过的PCR扩增N基因和测序表明细胞系基因组中存在N蛋白编码序列,IFA和Western blot试验验证了N蛋白在细胞系中稳定表达.为此,我们成功获得了稳定表达PRRSV N蛋白的Marc-145细胞系.