猪源多聚免疫球蛋白受体的表达及抗血清的制备

• 作者: 邹抒洁 付钰广 张韬 黄鑫 王金泉 刘光亮
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: pIgR 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 70-76
• 页数: 7页
• 分类号: S852.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0018

摘要

为了制备猪源pIgR蛋白的多克隆抗体,分析NCBI提供的猪源pIgR的胞外区基因序列并设计引物,经过PCR、酶切、连接,将目的 序列克隆入原核表达载体pET-30a(+),测序验证成功后,将带有目的 片段的重组质粒转化入大肠杆菌(E.coli) BL21 (DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,通过Ni-NTA亲和层析的方法获得了较为纯净的pIgR蛋白.用纯化后的pIgR与佐剂混合后免疫日本大白耳兔,制备兔源的多克隆抗体.结果 显示,本研究正确构建了带有pIgR基因的重组质粒,并成功表达pIgR蛋白,预测的分子质量约为82 ku;ELISA测定结果显示,pIgR蛋白免疫日本大白耳兔获得的多克隆抗体效价高,且在稀释至1∶3200时依然具有良好的反应性;Western-blot和IFA检测结果显示,制备的pIgR多克隆抗体特异性高、敏感性好.结果 表明,本次研究为后续深入探索猪机体黏膜免疫过程中pIgR相关的分子机制奠定了基础,为后期制备猪源pIgR的单克隆抗体提供了前期的物质准备.