初探lncRNA-Tubb4b的蛋白编码能力及其对微管基因的调控

• 作者: 冯美莹 卫恒习 李莉 张守全
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: lncRNA-Tubb4b 微管 Tubb4b 蛋白编码 小鼠
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 生物技术与繁殖|ANIMAL BIOTECHNOLOGY AND REPRODUCTION
• 页码范围: 179-187
• 页数: 9页
• 分类号: S814.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2022.01.018

摘要

旨在探索长链非编码Tubb4b基因(lncRNA-Tubb4b)是否具有蛋白编码能力及其对Tubb4b基因的调控作用.本研究在lncRNA-Tubb4b中添加起始密码子ATG、0/1/2个的T尾和Flag标记,通过构建载体、脂质体转染和Western blot等技术对lncRNA-Tubb4b蛋白编码能力进行分析;随后,构建过表达载体和合成siRNA,通过脂质体转染和实时荧光定量PCR等技术检测lncRNA-Tubb4b对微管基因Tubb4b的影响.结果 表明,我们扩增了添加0、1和2个T尾的Flag片段,其与lncRN A-T ubb4b融合后,成功构建到pcDNA3.1(-)载体中;转染小鼠精原细胞后发现,添加0、1和2个T尾的lncRNA-Tubb4b均没有FLAG蛋白条带;以pcDNA 3.1(-)-EGFP载体为对照,在小鼠精原细胞中过表达lncRNA-Tubb4b时,对照组细胞有荧光产生,试验组Tubb4b基因的mRNA表达水平极显著地降低(P＜0.01);在小鼠精原细胞中干扰lncRNA-Tubb4b表达后,极显著地提高Tubb4b基因的mRNA表达水平(P＜0.01).这表明,lncRN A-T ubb4b确实不编码蛋白质,过表达或干扰lncRNA-Tubb4b的表达会极显著地降低或升高Tubb4b基因的表达.