鸡传染性贫血病毒VP2蛋白单克隆抗体的研制及其识别抗原表位的鉴定

• 作者: 汪铭锐 吴俊花 王飞 邵红霞 钱琨 叶建强 秦爱建
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡传染性贫血病毒 VP2蛋白 单克隆抗体 抗原表位
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 基础兽医|BASIC VETERINARY MEDICINE
• 页码范围: 597-606
• 页数: 10页
• 分类号: S852.659.2|S852.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2022.02.026

摘要

拟制备针对鸡传染性贫血病毒(CIAV) VP2蛋白的单克隆抗体(mAb),为CIAV的诊断和病毒生物学特性研究提供有用制剂.以PCR技术扩增CIAV VP2基因并克隆到原核表达载体pET-32a中,经IPTG诱导表达.以原核表达的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术研制并筛选分泌抗CIAV VP2蛋白mAb的阳性杂交瘤细胞;采用截短表达CIAV VP2基因方法鉴定mAb识别的抗原表位.结果 显示:成功获得了1株能稳定分泌抗CIAV VP2蛋白mAb的杂交瘤细胞株,并命名为CIAV VP24A12;亚类鉴定结果表明,该mAb重链为IgG1型,轻链为kappa链;Western blot结果显示,该mAb可以识别大肠杆菌,Sf9细胞和转染pCAGGS-VP2-Flag的DF1细胞中表达的VP2蛋白.使用原核表达截短蛋白进行表位鉴定,发现该mAb识别抗原表位序列是1555KTVRW159,序列比对发现该表位在CIAV中高度保守.本研究成功制备了针对CIAV VP2蛋白的特异性mAb,并精确鉴定了其识别表位,为VP2蛋白功能的研究以及CIAV的诊断方法研发提供了有效工具.