喉鳞癌铁死亡的验证及M2巨噬细胞源性外泌体的调控研究

• 作者: 徐丽程 曹晶 李文静 杨镇鸣 赵蕊 张佳蕊 郭岩 葛靖春 李亮 孙亚男 刘鸣 田霖丽
• 来源期刊: 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志
• 关键词: 喉肿瘤 癌，鳞状细胞 巨噬细胞 外泌体 铁死亡
• 年，卷（期）: 2022,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 324-332
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn115330-20210621-00361

摘要

目的:验证喉鳞状细胞癌（简称鳞癌）铁死亡的变化以及探讨M2巨噬细胞来源的外泌体对喉癌铁死亡的调控作用。方法:收集哈尔滨医科大学附属第二医院耳鼻咽喉头颈外科2018年9月至2021年4月诊治的32例喉鳞癌和邻近非癌组织标本，其中男性26例，女性6例，年龄43~79岁。通过免疫组化和反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测组织铁死亡标志物谷胱甘肽过氧化物酶4（glutathione peroxidase 4，GPX4）的表达并分析其与临床病理因素的关系。通过透射电镜、细胞增殖-毒性检测试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）、克隆试验、活性氧（reactive oxygen species，ROS）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、谷胱甘肽（glutathione，GSH）、线粒体膜电位、RT-PCR和蛋白免疫印迹法（WB），检测铁死亡诱导剂erastin处理后喉鳞癌TU212细胞的变化。分离M0/M2巨噬细胞上清液中的外泌体（M0-exos/M2-exos），并与经过erastin处理的TU212细胞共同孵育，检测各组铁死亡变化情况。数据采用SPSS 19.0软件统计分析结果。结果:铁死亡标志物GPX4在喉鳞癌组织中的表达水平明显高于邻近非癌组织（2.04±0.65比0.99±0.09， F=30.36， P<0.001），且与临床分期及T分期密切相关（Ⅰ-Ⅱ期比Ⅲ-Ⅳ期：1.75±0.39比2.18±0.71， F=2.25；T1-2期比T3-4期：1.71±0.42比2.20±0.69， F=2.06， P值均<0.05）。TU212细胞经erastin处理后，出现铁死亡的改变，表现为细胞线粒体嵴变小、膜密度增大、增殖率降低、细胞内ROS和MDA水平升高、GSH含量下降、线粒体膜电位发生去极化，细胞内GPX4的mRNA和蛋白的表达降低。在白介素4（IL-4）诱导下，M0巨噬细胞极化为M2型，分离M2巨噬细胞上清液，获得外泌体（M2-exos），发现M2-exos能够诱导erastin处理的TU212细胞高表达GPX4和GSH，下调ROS和MDA的表达水平，逆转细胞的增殖能力（ P值均<0.05）。 结论:铁死亡是喉鳞癌细胞死亡的方式之一，M2巨噬细胞源性外泌体能够抑制喉鳞癌铁死亡的发生。