马链球菌兽疫亚种SclE蛋白原核表达及其免疫效力评价

• 作者: 徐宇萌 郭政 李亚娟 邓静飞 何颍欣 黄云飞 付强
• 来源期刊: 南方农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 马链球菌兽疫亚种(SEZ) SclE 亚单位疫苗 免疫
• 年，卷（期）: 2024,（8）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 277-285
• 页数: 9页
• 语种: 中文

摘要

【目的】探究马链球菌兽疫亚种（Streptococcus equi ssp. zooepidemicus,SEZ）表面蛋白SclE的免疫效力，为预防SEZ引起的链球菌病提供理论依据。【方法】采用PCR扩增SEZ的SclE基因，再将该片段克隆至原核表达pCold I载体上，然后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达后以SDS-PAGE进行分析鉴定，获得的重组蛋白SclE(rSclE)(100μg/mL,0.5 m L)以腹腔注射形式免疫BALB/c小鼠（n=10，一免、二免的周期均为14 d）。一免、二免14 d后收集血清，通过ELISA和Western blotting检测抗体水平和特异性。二免后进行免疫保护试验，并对攻毒后小鼠的肝、脾、肺、肾进行细菌载量检测和病理组织学观察。【结果】SDS-PAGE检测到大小约为93 kD的蛋白表达，与SclE的理论分子量大小一致；Western blotting检测显示，表达所得重组蛋白能与SEZ阳性对照组（腹腔注射0.5 mL SEZ灭活疫苗）小鼠血清发生特异性结合，表明其具有良好的反应原性。ELISA检测显示，二免后小鼠血清中特异性抗体水平与一免后相比均有显著提升（P<0.05，下同），且可诱导小鼠产生高滴度的IgG，其中IgG1抗体水平（0.436±0.031）显著高于IgG2a(0.161±0.009)，表明rSclE诱导的抗体亚型以IgG1为主；rSclE免疫小鼠可显著抑制SEZ在各脏器中的增殖能力，肝脏、脾脏出血及炎性细胞浸润的症状得到改善，肺脏和肾脏出血等病理损伤减轻；在小鼠免疫攻毒保护试验中保护70%小鼠免受致死剂量SEZ毒株的攻击。【结论】成功表达获得的r SclE能诱导小鼠产生SclE特异性抗体，且具有较好的保护效果，可作为一种SEZ潜在的疫苗候选抗原。