摘要:

目的探讨桃红四物汤加丹参对活化的人肝星形细胞(HSC)增殖和凋亡的影响,阐明其对肝纤维化的防治作用.方法将人肝星状细胞体外培养,加入不同浓度桃红四物汤加丹参干预48 h后,采用MTT法以及流式细胞仪检测其增殖及凋亡情况.结果桃红四物汤加丹参0.4mg/mL、0.2mg/mL两种浓度均能抑制肝星状细胞增殖,并能促进其凋亡.结论桃红四物汤加丹参具有抑制人肝星状细胞的增殖,诱导肝星状细胞凋亡的作用.可能为肝纤维化的中医药防治研究提供新的思路.

摘要:

目的：观察奥曲肽对活化人肝星状细胞凋亡和凋亡相关蛋白Bcl-2／Bax 表达的影响，探讨奥曲肽抗肝纤维化可能的作用机制。方法：不同浓度的奥曲肽作用于传代的人肝星状细胞株（HSC-LX2）24 h、48 h后，应用FITC-TUNEL检测各组细胞凋亡，应用免疫细胞化学法检测HSC-LX2中Bcl-2、Bax蛋白表达，应用Western-blot法检测HSC-LX2中Bcl-2蛋白表达。结果：奥曲肽可促进HSC-LX2细胞调亡，细胞凋亡率随奥曲肽浓度增加而增高（P ＜0．05）；与24 h比较，相同浓度奥曲肽作用于HSC-LX248 h细胞凋亡率均明显增高（P ＜0．05）；免疫细胞化学结果显示：与对照组相比，奥曲肽明显降低HSC-LX2中Bcl-2蛋白表达，而增加Bax蛋白表达（P ＜0．05）；Western-blot结果表明：与对照组相比，奥曲肽可明显降低HSC-LX2中Bcl-2蛋白表达（P ＜0．05）。结论：奥曲肽可呈剂量和时间依赖性促进人肝星状细胞凋亡，其机制可能与奥曲肽诱发人肝星状细胞Bcl-2蛋白表达下调，Bax蛋白表达上调有关。

摘要:

目的 通过研究羟基喜树碱(HCPT)对体外培养的人肝星状细胞株(HSC-LX2)增殖和凋亡的影响,并探讨其诱导HSC-LX2凋亡可能的分子机制,进一步阐明HCPT抗肝纤维化的作用,为HCPT抗肝纤维化的临床应用提供实验和理论依据.方法 在实验组(以不同浓度的羟基喜树碱在体外作用于人肝星状细胞株(HSC-LX2)和空白对照组,应用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞增殖情况,找出HCPT对HSC-LX2细胞增殖抑制的最佳作用浓度;流式细胞术检测细胞凋亡率:透射电镜下观察细胞凋亡的形态学变化情况,DNA片段电泳分析.结果 与空白对照组比较,MTT法显示,羟基喜树碱浓度在3.125ug,/ml-100ug/ml组中对人肝星状细胞株(HSC-LX2)的增殖抑制率显著增高(p＜0.01);在0.05 mg/ml组出现细胞早期凋亡现象,在0.1 mg/ml的HCPT作用HSC-LX2细胞24h,透射电镜下可见细胞体积缩小,核仁消失,染色质浓缩聚集成团块状,沿核膜排列等凋亡形态学改变;琼脂糖凝胶电泳可见明显的DNA梯度带形成.结论 HCPT在体外可以明显的抑制HSC-LX2细胞的增殖、诱导HSC-LX2细胞凋亡,作用强度呈剂量依赖性,为将来进一步研究HCPT对肝纤维化的影响奠定了基础.

摘要:

目的 探讨荔枝核总黄酮(TFL)对转化生长因子β1(TGF-31)诱导的人肝星状细胞(HSC-LX2)凋亡的影响,探讨其相关的分子机制.方法 将培养好的HSC-LX2随机分为正常组、TGF-β1组及150、300、600 mg/LTFL组.正常组常规培养;其他四组接种于含10％ FBS的DMEM+5μg/L TGF-β1、培养皿中培养24 h后,150、300、600 mg/L TFL组分别加入150、300、600 mg/L TFL继续培养48 h.用Hoechst33258染色法观察各组细胞形态学变化;用流式细胞术检测细胞周期;用FITC Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡情况;用Western blotting法检测细胞中Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)、白细胞介素1受体Ⅰ(IL-1R Ⅰ)蛋白表达.结果 正常组、TGF-β1组细胞核形态完整,TGF-β1组细胞增殖活跃;150、300、600 mg,/L TFL组可见细胞核固缩、裂解、凋亡小体形成等细胞凋亡形态学变化.随TFL浓度升高,TFL组G0/G1期细胞增多(P＜0.05),S期细胞减少(P＜0.05).随TFL浓度升高,TFL对HSC-LX2凋亡具有促进作用,更倾向于促进细胞晚期凋亡.150、300、600 mg/L TFL组TLR4、NF-κB、IL-1R Ⅰ蛋白表达量低于TGF-β1组(P均＜0.05);且随TFL浓度升高,HSC-LX2内TLR4、NF-κB、IL-1R Ⅰ蛋白表达量逐渐降低(P均＜0.05).结论 TFL可促进TGF-β1诱导的HSC-LX2细胞凋亡,尤其促进细胞晚期凋亡;其分子机制可能与降低细胞内TLR4、NF-κB、IL-1R Ⅰ的表达有关.

摘要:

目的:探讨靶向人结缔组织生长因子(CTGF)锤头核酶对人肝星状细胞系(LX-2)细胞Ⅰ型胶原转录和分泌及细胞增殖的抑制作用,为肝纤维化基因治疗提供实验依据.方法:构建含有CTGF锤头核酶及其5'和3'端分别连接一自剪酶cDNA序列的重组质粒pTriCTGF-Rz.实验分5组:未转染组、空质粒pTriEx2转染组、空质粒转染加TGF-1组、pTriCTGF-Rz转染组和pTriCTGF-Rz转染加TGF-1组.半定量RT-PCR检测CTGF mRNA和Ⅰ型胶原mRNA水平,ELISA检测LX-2细胞分泌Ⅰ型胶原的水平,流式细胞仪检测LX-2细胞周期.结果:与pTriEx2转染组比较,pTriCTGF-Rz组LX-2细胞CTGF mRNA水平和TGF-1诱导CTGFmRNA的水平降低(P＜0.05),pTriCTGF-Rz组LX-2细胞Ⅰ型胶原mRNA转录和蛋白分泌减少,TGF-1诱导Ⅰ型胶原的转录水平降低(P＜0.05).与空质粒pTriEx2转染组比较,pTriCTGF-Rz转染组LX-2细胞G0-G1期细胞数增多(P＜0.05),S期细胞减少(P＜0.01).结论:靶向CTGF的锤头核酶具有抑制人肝星状细胞介导肝纤维化的作用,可能成为肝纤维化基因治疗的新途径.

摘要:

目的 研究荔枝核总黄酮(TFL)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肝星状细胞(HSC-LX2)增殖与核因子-kB(NF-κB)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.方法 体外培养HSC-LX2,TGF-β1刺激24 h后给予不同浓度的TFL(80、160、320、640、800 μg/ml)干预;给药后24、48、72 h,用MTT法分别检测TFL对HSC-LX2增殖的影响;采用半定量PCR检测各组NF-κB、α-SMA mRNA的表达;Western blot检测NF-κB、α-SMA蛋白的表达情况.结果 MTT检测结果显示TFL呈时间依赖性抑制TGF-β1诱导HSC-LX2增殖,以作用48 h最为明显,其半数抑制浓度(IC50)为302 μg/ml.TFL各剂量组作用48 h后,HSC-LX2细胞中NF-κB和α-SMA基因和蛋白的表达水平都降低,尤以300μg/ml和600μg/ml药物浓度组较明显,与对照组比较,有显著性差异(P＜0.05).结论 TFL在体外对TGF-β1诱导的HSC-LX2的增殖有抑制作用,其作用机制可能是通过抑制细胞中NF-κB的表达,从而起到抗肝纤维化的作用.

摘要:

目的 观察肝龙胶囊联合水飞蓟素对人肝星状细胞系(LX-2)转化生长因子-β1(TGF-β1)、肝纤维化指标表达的影响,以及体外抗肝纤维化作用.方法 体外培养LX-2细胞,将对数期细胞分为水飞蓟素用药组、肝龙胶囊联合水飞蓟素用药组、阴性组.采用酶联免疫吸附法检测TGF-β1、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)水平的变化;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Col-I、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)mRNA的表达.结果 与水飞蓟素用药组相比,肝龙胶囊联合水飞蓟素用药组TGF-β1水平降低(P<0.05);24和48 h时,LX-2细胞LN、HA、Col-Ⅰ水平降低(P<0.05);24 h时,PCⅢ、Ⅳ-C水平降低(P<0.05).与阴性组比较,肝龙胶囊联合水飞蓟素用药组在高浓度联合时可降低LN、HA、Col-Ⅰ、Ⅳ-C的含量(P<0.05),在低浓度时则增加LN、HA、Col-Ⅰ、Ⅳ-C的含量(P<0.05),对PCⅢ、TGF-β1的水平无影响(P>0.05).与水飞蓟素用药组相比,肝龙胶囊联合水飞蓟素用药组降低TIMP-1 mRNA的表达(P<0.05),在高浓度联合并在72 h时降低Col-ⅠmRNA的表达(P<0.05),在低浓度联合时则增加Col-ⅠmRNA的表达(P<0.05).结论 肝龙胶囊联合水飞蓟素可通过减少细胞外基质的生成,增强水飞蓟素体外抗肝纤维化作用.

摘要:

目的：探讨甲基阿魏酸（MFA）对转化生长因子（TGF）-β1刺激人肝星状细胞（HSC）-LX-2增殖及活化的抑制作用。方法将体外培养的 HSC-LX-2细胞作为正常对照组，采用1μg／L TGF-β1刺激 HSC-LX-2进行细胞造模为模型组，药物组含终质量浓度为1μg／L 的 TGF-β1和0．3125、0．625、1．25、2．5、5、10、20、40 mg／L 的 MFA。根据 MTT 法检测MFA 对药物组 HSC-LX-2细胞增殖的影响，选择 MFA 作用浓度为1．25、2．5、5 mg／L 作为低、中、高剂量组，将细胞孵育72 h 后，采用 RT-PCR 法检测各组α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）mRNA、Ⅰ型前胶原（PCⅠ）mRNA 表达；采用 Western blotting 法检测各组α-SMA 蛋白表达；采用 ELISA 法检测各组 PCⅠ蛋白表达。结果在0．3125～5 mg／L 质量浓度范围内，随着MFA 质量浓度升高，HSC-LX-2细胞生长抑制率逐渐升高，呈浓度依赖性（P 均＜0．05）；当 MFA 质量浓度大于10 mg／L时，HSC-LX-2生长抑制率逐渐降低（P 均＜0．05）。在1．25～5．0 mg／L 范围内随 MFA 质量浓度逐渐增高，HSC-LX-2细胞中α-SMA 及 PCⅠ的 mRNA 及蛋白表达量逐渐降低（P 均＜0．05）。结论 MFA 可抑制 TGF-β1刺激的人肝星状细胞-LX-2增殖，减弱α-SMA、PCⅠ表达，抑制 HSC-LX-2细胞外基质的合成及 HSC-LX-2表型的转化。

摘要:

目的 观察Kruppel样因子4(KLF4)基因沉默对大鼠肝星状细胞HSC-T6中Smad 2、3、7 mRNA及蛋白表达的影响.方法 设计并构建针对大鼠KLF4基因的3个干扰质粒(pGPU6-1、pGPU6-2、pGPU6-3),将质粒转染HSC-T6细胞,检测KLF4mRNA及蛋白,筛选出沉默效果最好的重组质粒用于后续实验.将HSC-T6细胞分为A、B、C、D组,A组常规培养细胞;B组在培养液中加入TGF-β1 50 ng/mL;C组转染重组质粒pGPU6-3;D组转染干扰质粒pGPU6-3 24 h后,再加入TGF-β1 50 ng/mL.采用real-time PCR法检测各组细胞中的Smad2、Smad3、Smad7 mRNA.采用Western blotting法检测各组细胞中的Smad2、Smad3、Smad7蛋白和磷酸化Smad2、3(p-Smad2、3)蛋白.结果 B、D组细胞中Smad2、Smad3、Smad7 mRNA相对表达量高于A组,C组细胞中Smad7 mRNA相对表达量高于A组(P均＜0.05).C组、D组细胞中p-Smad2、p-Smad3蛋白相对表达量低于A组,Smad7蛋白相对表达量高于A组(P均＜0.05).B组细胞中Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3、Smad7蛋白相对表达量均高于A组(P均＜0.05).结论 KLF4基因沉默后,HSC-T6细胞(包括被TGF-β1激活的HSC-T6)中p-Smad2、p-Smad3蛋白表达下调,Smad7 mRNA及蛋白表达上调;抑制KLF4基因表达可能有抗纤维化作用,作用机制与抑制TGF-β1/Smad信号通路激活有关.

摘要: