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一种猕猴抵抗素基因cDNA全长序列的克隆方法，涉及一种动物基因序列，尤其涉及一种猕猴抵抗素基因cDNA全长序列的克隆，属基因工程技术领域。该基因序列是运用人类抵抗素基因已知片段设计引物，用猕猴脂肪组织提取总RNA，进行RT-PCR扩增，用扩增到的猕猴抵抗素基因片段作为已知序列，再采用RACE技术，通过5'-RACE和3'-RACE钓取已知片段序列5'端和3'端的未知序列，运用序列拼接软件将得到的cDNA序列拼接后得到的。

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目的 对红外线耳温计与水银体温计测量猕猴体温差异性进行比较,为临床、动物实验等开展体温测量提供一种简单、快速、损伤小的方法.方法 选人工繁育3～4岁猕猴共80只,分为麻醉组和非麻醉组,同时采用两种测量仪对猕猴进行体温测量,比较二者之间的差异.结果 麻醉组:在性别上两种测量仪器所测量的结果都无差异(P＞0.05),耳温比直肠温低1.49±0.55℃,耳温与直肠温均存在极显著差异(P＜0.01);非麻醉组:在性别上两种测量仪器所测量的结果都无差异(P＞0.05),耳温比直肠温低2.19±0.53℃,耳温与直肠温均存在极显著差异(P＜0.01);麻醉组与非麻醉组比较,耳温不存在差异(P＞0.05),直肠温存在极显著性差异(P＜0.01).结论 红外线耳温计所测量的温度明显低于水银体温计测量的直肠温度,在麻醉状态下实际温度应为所测耳温加1.49℃,而在非麻醉状态下加2.19℃.

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挑选体重相近,健康的40只1岁自繁猕猴.按日粮钙和磷水平,将试验猴随机分为A、B两个组,再根据钙磷比1.2:1、1.4:1、1.6:1、1.8:1和2.0:1,将A、B各分为5个处理组,即A1、A2、A3、A4、A5和B1、B2、B3、B4、B5,每个处理组4只试验猴,雌雄搭配,单笼饲养.各处理组日粮的钙、磷水平和钙磷比用饲料级CaCO3、CaHPO4和分析纯NaH2PO4调配.试验结果表明,A组在1.6%钙水平下钙磷比对生长期实验猕猴钙、磷利用率的影响不显著(P＞0.05);B组在0.98%磷水平下,B1处理组钙、磷利用率显著高于其余4个处理组(P＜0.01.实验结果表明,生长期猕猴日粮在0.89%磷水平下,最适钙磷比是1.2:1,并且日粮钙、磷水平和钙磷比对钙、磷利用率具有互作效应.

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目的研究植酸酶对不同年龄段猕猴蛋白质和钙、磷消化利用的影响.方法随机挑选健康亚成年和成年猕猴各8只,将其分为亚成年试验组、亚成年对照组和成年试验组、成年对照组,每组4只.通过蛋白质消化试验和钙磷平衡试验研究植酸酶对猕猴蛋白质消化率和钙磷利用率的影响.结果亚成年试验组和对照组的蛋白质消化率(%)分别为88.43±1.83和81.39±2.28,钙、磷总利用率(%)分别为61.70±3.70、84.01±2.84和45.32±9.63、71.15±4.67.成年试验组和对照组的蛋白质消化率(%)分别为89.28±1.63和81.65±2.95,钙、磷总利用率(%)分别为34.18±10.41、81.97±3.38和21.18±6.56、69.23±9.15.亚成年与成年试验组和对照组的蛋白质消化率和钙、磷利用率均有不同程度的提高,成年组的磷总利用率存在着显著差异(P＜0.05),亚成年组的蛋白质消化率和钙、磷总利用率及成年组的蛋白质消化率却存在着极显著差异(P＜0.01).结论植酸酶可显著提高亚成年猕猴的蛋白质消化率和钙、磷利用率,但对成年猕猴的钙利用率无提高作用.

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目的 通过对引进食蟹猴肠道微生物检测分离到的奇异变形杆菌进行鉴定和药敏实验,为引进的实验猴微生物检测和如何开展饲养管理、疾病防控提供理论和技术支撑.方法 肛拭子采集食蟹猴粪样,进行细菌分离培养、生化鉴定、药敏试验和小鼠致病性试验.结果 60只食蟹猴中有8只分离到可疑细菌,经鉴定为奇异变形杆菌,表明该群体食蟹猴奇异变形杆菌感染率为13.3％;药敏试验结果显示该菌对头孢曲松、头孢赛肟,头孢哌酮、头孢唑啉、青霉素等高度敏感,对阿米卡星、庆大霉素、氨苄西林钠、呋喃妥因等中度敏感,对诺氟沙星、四环素、低度敏感、对杆菌肽、环丙沙星、卡那霉素、林可霉素和呋喃唑酮产生耐药性;小鼠致病性试验表明分离到的菌株对小鼠有较强的致病性.结论 食蟹猴奇异变形杆菌感染相对较高,该菌对头孢菌素类抗生素较敏感,可在临床中作为首选药物来进行疾病的治疗.该菌有较强的致病性,对食蟹猴群体有潜在的危害性,在平时饲养管理工作中应引起重视.

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目的 通过研究猕猴血清蛋白和血脂,分析调查各年龄段蛋白质和脂肪的营养代谢状况.方法 在猴场中随机挑选幼年、成年和老年健康试验猴各30只,共90只,测定其血清蛋白和血脂以及日粮的营养水平,分析各年龄段的血清蛋白和血脂变化情况.结果 日粮的能量(GE)、粗蛋白(CP)、粗脂肪(EE)、粗纤维(CF)、无氮浸出物(NFE)、粗灰分(CA)、钙(Ca)和磷(P)的测定值分别为15.36MJ/kg、17.96%、2.59%、3.30%、69.55%、4.27%、1.01%和0.55%:血清白蛋白(ALB)幼年组高于成年和老年组(P＜0.01);甘油三酯(TG)老年组高于幼年和成年组,并且老年组与成年组之间有极显著差异(P＜0.01);高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)成年组低于老年和幼年组(P＜0.01);低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C).则幼年组高于成年和老年组(P＜0.01);脂蛋白(a)[Lp(a)]成年组高于幼年和老年组(P＜0.05),其余各项指标均无显著性变化(P＞0.05).结论 蛋白质营养代谢状况幼年组优于成年和老年组,脂类的代谢作用则是成年组强于幼年和老年组;Lp(a)高出人类正常值2.5～4.5倍,其余各项指标却与人类极为相似.

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目的 表达、纯化和鉴定猴源GII.17型诺如病毒(NoV)基因组P结构域及其变体蛋白.方法 基于本实验室获得的猴源GII.17型NoV基因组P结构域的核苷酸序列,按大肠杆菌密码子使用的偏好性优化P结构域的核苷酸序列,人工合成相应的基因.以此基因为模板,通过PCR方法扩增得到P结构域的变体基因.采用无缝连接的方法将P结构域基因及其变体克隆到原核表达载体,进行蛋白诱导表达和纯化.最后,通过免疫印迹法和ELISA法分析表达蛋白的抗原性.结果 测序结果表明,P结构域及其变体成功地克隆至原核表达载体.SDS-PAGE分析显示,P结构域在原核细胞的超声裂解上清和沉淀中都有表达,而其变体主要表达于上清.免疫印迹和ELISA结果显示,表达纯化得到的P结构域及其变体蛋白具有很好的抗原性.表达的蛋白免疫小鼠制备的相应抗体ELSIA效价可达到1∶32000.结论 成功地表达了猴源GII.17 NoV基因组P结构域及其变体蛋白,并且通过免疫小鼠得到了相应的抗体,为后期检测试剂盒的研发、病毒鉴定和病毒受体结合实验奠定了基础.

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本发明提供一种含有重组人成纤维细胞生长因子21(hFGF21)融合蛋白的表达和纯化方法，表达过程，所述融合蛋白为GST蛋白与重组人成纤维细胞生长因子21融合蛋白，构建成带GST标签质粒后转入BL21，IPTG诱导表达，以包涵体形式大量表达，纯化以离子交换层析柱和GST亲和柱两步，得到量大且纯度高的蛋白。本发明的有益效果是选用GST系统表达hFGF21蛋白，通过诱导条件的优化大幅度提高了蛋白表达量；经过离子交换柱层析纯化和GST亲和柱二次纯化，不仅可尽量减小蛋白的损失，还可有效提高蛋白纯度；对hFGF21蛋白的成药性开发具有重要的现实意义。

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本发明公开了一种携带恒河猴抵抗素剪接体基因慢病毒载体的构建方法，运用普通PCR直接同时扩增抵抗素全长和剪接体基因，用胶回收方法直接回收剪接体条带，然后进行载体的快速克隆测序；使用慢病毒载体高效转染试剂转染所有慢病毒载体质粒，并使用灭活血清包装慢病毒颗粒，并获得高滴度的重组慢病毒原液。本发明可免去PCR+1方法筛选大量的工作和高额的费用，消除获得剪接体基因的概率限制，并高效、快速、廉价地直接获得剪接体基因；可高效转染慢病毒载体质粒，并获得高滴度的重组慢病毒滴度。