猴源GII.17型诺如病毒基因组P结构域及其变体的原核表达、纯化和抗原性鉴定

• 作者: 刘建生 刘波 刘红旗 和占龙 李昕潼 李超 陶玉芬
• 来源期刊: 实验动物与比较医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 猴 诺如病毒基因组 P结构域 蛋白表达 抗原性
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 334-339
• 页数: 6页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 3481字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2016.05.002

摘要

目的 表达、纯化和鉴定猴源GII.17型诺如病毒(NoV)基因组P结构域及其变体蛋白.方法 基于本实验室获得的猴源GII.17型NoV基因组P结构域的核苷酸序列,按大肠杆菌密码子使用的偏好性优化P结构域的核苷酸序列,人工合成相应的基因.以此基因为模板,通过PCR方法扩增得到P结构域的变体基因.采用无缝连接的方法将P结构域基因及其变体克隆到原核表达载体,进行蛋白诱导表达和纯化.最后,通过免疫印迹法和ELISA法分析表达蛋白的抗原性.结果 测序结果表明,P结构域及其变体成功地克隆至原核表达载体.SDS-PAGE分析显示,P结构域在原核细胞的超声裂解上清和沉淀中都有表达,而其变体主要表达于上清.免疫印迹和ELISA结果显示,表达纯化得到的P结构域及其变体蛋白具有很好的抗原性.表达的蛋白免疫小鼠制备的相应抗体ELSIA效价可达到1∶32000.结论 成功地表达了猴源GII.17 NoV基因组P结构域及其变体蛋白,并且通过免疫小鼠得到了相应的抗体,为后期检测试剂盒的研发、病毒鉴定和病毒受体结合实验奠定了基础.