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定量描述微生物群落的组成,在微生物生态学的许多研究领域都是非常重要的.然而由于可培养技术的局限性,定量描述微生物群落成为比较困难的事情.最近包括PCR技术在内的分子生物学技术为人们提供了有力的工具,使对微生物群落的分布、丰度等有了进一步的了解.实时荧光定量PCR技术作为核酸定量检测技术,自从发明以来在微生物生态学研究中逐渐得到了广泛的应用.从微生物生态学角度,综述了实时荧光定量PCR技术的原理、发展、优缺点及其在微生物生态学研究中的应用与研究进展,并探讨了实时荧光定量PCR技术的发展和应用前景.

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荧光定量PCR技术是近年发展起来的一种用于基因定量分析的PCR方法,自同世以来在基础科学研究、临床诊断、疾病研究及药物研发等领域应用较为广泛.在植物研究方面应用起步较晚,现已开始用于植物基因表达分析、外源基因基因鉴定等方面的研究.介绍了实时荧光定量PCR技术的原理、优缺点和试验中潜在问题和条件的优化,并对其在植物研究中的应用及前景作了探讨.

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目的 研究动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)时血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)大电导钙激活钾通道(big conductance Ca2+-activated K+-channel,BKCa)活性和α亚单位表达的变化及意义.方法 高脂饮食建立兔动脉粥样硬化动物模型,利用膜片钳单通道记录技术记录AS组和对照组VSMC BKCa开放概率(Po),平均关闭时间(Tc).应用实时荧光定量PCR技术分析Bkca α亚单位编码基因KCMA1的mRNA表达水平.结果 ①在cell-attachedpatches(膜电位+40mV)下,AS组和对照组的平均关闭时间(Tc)分别为(114.644±48.379)ms和(291.603±180.075)ms(P<0.001,n=10),开放概率(Po)分别为(0.1325±0.0555)和(0.0601±0.0433)(P<0.01,n=10);在inside-out patches(膜电位+40mV)下.二者的Tc为(69.075±37.711)ms和(396.876±177.161)ms(P<0.001,n=10),Po为(0.1676±0.1174)和(0.0409±0.177)(P<0.01,n=10);②AS组Bkca α亚单位表达减少.动脉粥样硬化兔KCMA1和GAPDH相对含量比为(0.68±0.5);对照组(3.19±2.14).结论 兔胸主动脉VSMC Bkca在AS时α亚单位表达减少,但活性显著增强;Bkca的活动可能作为AS时血管内皮源性舒张受损的一种选择性补偿机制,延缓动脉粥样硬化的进程.

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目的 探讨肝细胞癌(HCC)患者血清miRNA-200c表达变化及其临床意义.方法 选择HCC患者60例(HCC组)、体检健康者60例(对照组),采用实时荧光定量PCR技术检测两组血清miRNA-200c表达,并分析其表达与患者临床病理参数的关系.以血清miRNA-200c表达的均数为界值,分为miRNA400c高表达和miRNA-200c低表达者,比较二者生存时间.结果 HCC组及对照组血清miRNA-200c相对表达量分别为0.51±0.11、0.78±0.13,两组比较P＜0.01.HCC患者miRNA-200c低表达与肿瘤直径、TNM分期有关(P均＜0.01).miR-NA400c高表达者生存时间明显长于miRNA-200c低表达者(x2=8.551,P＜0.01).结论 HCC患者血清miRNA-200c低表达,其表达变化可促进HCC的发生、发展,并与患者预后有关.

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目的:探讨孕妇血浆中胎儿游离mRNA含量变化作为产前筛查指标的可行性.方法:选择39例早中孕期(8～14周)孕妇为研究对象,其中15例行人工流产(A组),11例为稽留流产或胚胎发育异常(B组),13例为正常早孕期单胎孕妇(C组),提取其外周血血浆游离mRNA,应用实时荧光定量PCR技术(QF-PCR)检测胎盘来源的hPL,β-HCG,TFPI2基因,以此确定母体血浆中的胎儿游离mRNA含量,同时检测代表母体与胎儿总游离mRNA的18srRNA基因作为内参.结果:3组孕妇血浆标本中均检测到hPL,β-HCG,TFP12基因及18srRNA基因,且不依赖于胎儿性别,3组样本表达量有差异,B组TFPI2基因显著高于A、C组(P<0.01).结论:实时荧光定量PCR方法的灵敏度和特异性较高,作为非创性产前基因诊断的一种方法可应用于临床.胎儿游离mRNA可能成为产前筛查的有效指标.

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口蹄疫是世界上危害最严重的动物疾病之一,可使世界范围内的畜牧业遭受严重的经济损失,并危害人体健康.而防制口蹄疫的重要环节是要作出及时、准确的诊断.本文对口蹄疫新型诊断技术包括基因芯片技术、免疫层析快速诊断试纸条、实时荧光定量PCR技术、生物传感器的研究进展进行了介绍.

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目的：分析南昌地区女性高危人乳头瘤状病毒的感染状况及年龄分布特点。方法利用实时荧光定量PCR技术对来我院357例已婚妇女健康体检者行高危型HR-HPV-16、18检测。结果在357例妇女中共检出高危型HR-HPV-16、18妇女24例,阳性率6.7%(24/357),36~40岁阳性率9.7%(7/72),41~45岁的阳性率10.3%(6/58)最高。结论其中36~40岁和41~45岁这两个年龄段的阳性率高,以41~45岁为最高。妇女高危型HR-HPV-16、18检测可为宫颈癌的早期诊断、预防及疗效观察提供实验诊断依据。

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实时荧光定量PCR技术作为一种高效的微生物定量检测法,在食品工业中具有广泛的应用前景.本文综述了实时荧光定量PCR技术检测原理,及其在食源性致病菌如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157:H7、沙门氏菌和副溶血性弧菌检测中的应用.

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目的 对1例Amelogenin基因座分型结果为“X,Y”的“女性”进行分子遗传学分析.方法 采用PCR-STR技术检测Y-STR和X-STR基因座,实时荧光定量PCR技术检测SRY基因,原位荧光杂交(FISH)技术分析外周血细胞性染色体情况.结果 采用Y-filer试剂盒仅检见短臂上的4个Y-STR基因座,AGCU X19试剂盒的19个X-STR基因座全部检出,但均为纯合子;SRY基因检测为阳性;外周血细胞FISH检测结果显示只有一条X染色体.结论 推断该个体是伴有Y染色体物质隐匿嵌合的Turner综合征患者.在法医物证检验中,应重视该类社会性别与Amelogenin基因座检测结果不符的特殊个体,防止发生性别误判.

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目的 探索实时荧光定量PCR技术在检测男性不育患者Y染色体微缺失中应用的可行性.方法 利用实时荧光定量PCR技术对2015年3-10月于我院就诊的443例男性不育患者的Y染色体长臂AZFa、AZFb.AZFc和AZFd4个区域的8个位点进行检测,并用多重PCR方法对检测出的存在Y染色体微缺失的标本进行验证.结果 共检测出3例男性不育患者发生Y染色体微缺,并通过多重PCR方法得到验证.3例Y染色体微缺病例均发生于非梗阻性无精症患者,其中2例为AZFc+d区缺失,l例为AZFb+c+d区缺失,占非梗阻性无精症的10.3％.结论 实时荧光定量PCR技术可用于Y染色体微缺失的检测,且对筛查不育症患者具临床价值.