摘要:

目的 研究miR-124是否通过调控预测的靶基因活化T细胞核因子c1(NFATc1)表达调节小鼠C3H10T1/2细胞的软骨分化.方法 培养C3H10T1/2细胞,行软骨诱导分化,采用实时定量PCR和蛋白免疫印迹法检测NFATc1和软骨标记基因Aggrecan、CollagenⅡ、Collagen X mRNA及蛋白的表达水平.使用在线靶基因预测软件预测NFATc1 mRNA的3’端非翻译区(3'UTR)结合位点,构建NFATc1 3'UTR野生型及突变型的荧光素酶报告载体,检测双荧光素酶报告基因,观察miR-124对NFATc1 3'UTR荧光素酶活性的影响.转染miR-124模拟物或抑制物并进行软骨诱导,观察miR-124对NFATc1的调控作用.结果 与诱导前比较,成软骨诱导组软骨分化相关基因Aggrecan、Col2a1和Col10a1 mRNA表达水平升高(P均＜0.01);Sox9和NFATc1 mRNA表达水平随着软骨分化进展而增加(P均＜0.001);Col2a1、Sox 9和NFATc1蛋白呈逐渐增强表达,而肥厚性标记Col10a1蛋白显示较稳定表达.NFATc1 mRNA的3'UTR与miR-124的种子区存在理论上的互补碱基配对序列.转染NFATc1野生型质粒的C3H10T1/2细胞中,加入miR-124模拟物者的荧光素酶活性低于加入miR-124抑制物者,加入miR-124抑制物者的蛋白表达强于加入miR-124模拟物者(P均＜0.05);转染NFATc1突变型质粒的C3H10T1/2细胞中,加入miR-124模拟物与加入miR-124抑制物的荧光素酶活性无变化(P＞0.05).蛋白免疫印迹法与实时定量PCR结果均显示,转染miR-124组与si-NFATc1组的NFATc1表达水平低于Control组(P均＜0.01),miR-124组与si-NFATc1组的NFATc1表达水平相近(P＞0.05).过表达miR-124后,NFATc1大约降低了60％,而这种降低可被miR-124抑制物逆转.转染N FATc1野生型质粒的miR-124模拟物组的NFATc1荧光素酶活性减低(P均＜0.05),转染NFATc1突变型质粒的miR-124模拟物组NFATc1荧光素酶活性无变化(P均＞0.05).结论 miR-124通过抑制靶基因NFATc1的表达调控C3H10T1/2细胞软骨分化.

摘要:

目的:探讨血浆微小核糖核酸-200b(miRNA-200b)及微小核糖核酸-21(miRNA-21)在上皮性卵巢癌(EOC)中的表达及其临床意义.方法:采用RT-PCR检测162例EOC患者、120例上皮性卵巢良性肿瘤患者(良性组)和108例健康女性(对照组)血浆miRNA-200b、miRNA-21及CA125表达水平,分析miRNA-200b及miRNA-21表达水平与EOC临床病理特征的关系.应用ROC曲线评价miRNA-200b、miRNA-21及CA125对EOC诊断的灵敏度和特异度,多元Logistic回归模型分析三项指标与EOC的关系.Pearson相关分析EOC患者血浆miRNA-200b与miRNA-21、CA125的相关性.结果:EOC组血浆miRNA-200b、miRNA-21及CA125表达水平均明显高于良性组和对照组[miRNA-200b(2-ΔΔCt):3.52 ±1.03 vs 1.26 ±0.37和1.15±0.34;miRNA-21(2-ΔΔCt):2.32±0.45 vs 1.18±0.32和1.04±0.28;CA125(U/ml):78.64±30.57 vs 26.27±11.36和21.53± 9.45,均 P<0.01].血浆 miRNA-200b、miRNA-21、CA125及三项联合诊断 EOC 的 AUC(95% CI)分别为0.896(0.834 ~0.958)、0.792(0.731~0.847)、0.908(0.841 ~0.973)、0.947(0.883 ~0.995),其最佳截值分别为2.08、1.46、52.84 U/ml.Logistic回归分析显示,血浆miRNA-200b、miRNA-21及CA125水平升高是EOC发生的独立危险因素[OR(95% CI)=2.518 (1.563~3.547),OR(95% CI)=1.724(1.103~2.528),OR(95% CI)=2.316(1.347 ~3.419)].EOC患者血浆miRNA-200b与CA125的相关性最好(r=0.702,P<0.01).结论:血浆miRNA-200b及miRNA-21可作为早期诊断EOC的分子标志物,其诊断效能与CA125相当,三项联合应用有望提高EOC早期诊断的准确性.

摘要:

目的:研究美多芭联合普拉克索对帕金森病患者血浆微小核糖核酸-124(miR-124)、微小核糖核酸-137(miR-137)和非运动症状的影响.方法:选择2017年7月至2019年4月在我院接受治疗的82例帕金森病患者,随机法分为对照组和研究组,每组41例,对照组采用美多芭治疗,研究组基于对照组采用普拉克索治疗,观察并比较两组临床疗效,统一帕金森氏病评分量表(UPDRS),血浆miR-124、miR-137水平,非运动症状改善情况,药物副反应.结果:治疗后3个月,研究组总有效率高于对照组(P<0.05).治疗后1个月和3个月,两组各项UPDRS评分均下降,且研究组低于对照组,两组UP-DRS评分在不同治疗方法、时间上比较有统计学差异(P<0.05).治疗后1个月和3个月,两组血浆miR-124均上升,且研究组高于对照组,两组血浆miR-137均下降,研究组低于对照组,两组血浆miR-124、miR-137在不同治疗方法、时间上比较有统计学差异(P<0.05).研究组抑郁、焦虑和失眠率低于对照组(P<0.05),两组认知障碍、嗜睡、便秘和低血压发生率比较无统计学差异(P>0.05).两组药物副反应总发生率比较无统计学差异(P>0.05).结论:美多芭联合普拉克索可提高帕金森病的疗效,调节血浆miR-124、miR-137表达,并改善非运动症状.

摘要:

目的 研究miR-124是否通过调控预测的靶基因活化T细胞核因子c1(NFATc1)表达调节小鼠C3H10T1/2细胞的软骨分化.方法 培养C3H10T1/2细胞,行软骨诱导分化,采用实时定量PCR和蛋白免疫印迹法检测NFATc1和软骨标记基因Aggrecan、CollagenⅡ、Collagen X mRNA及蛋白的表达水平.使用在线靶基因预测软件预测NFATc1 mRNA的3’端非翻译区(3'UTR)结合位点,构建NFATc1 3'UTR野生型及突变型的荧光素酶报告载体,检测双荧光素酶报告基因,观察miR-124对NFATc1 3'UTR荧光素酶活性的影响.转染miR-124模拟物或抑制物并进行软骨诱导,观察miR-124对NFATc1的调控作用.结果 与诱导前比较,成软骨诱导组软骨分化相关基因Aggrecan、Col2a1和Col10a1 mRNA表达水平升高(P均＜0.01);Sox9和NFATc1 mRNA表达水平随着软骨分化进展而增加(P均＜0.001);Col2a1、Sox 9和NFATc1蛋白呈逐渐增强表达,而肥厚性标记Col10a1蛋白显示较稳定表达.NFATc1 mRNA的3'UTR与miR-124的种子区存在理论上的互补碱基配对序列.转染NFATc1野生型质粒的C3H10T1/2细胞中,加入miR-124模拟物者的荧光素酶活性低于加入miR-124抑制物者,加入miR-124抑制物者的蛋白表达强于加入miR-124模拟物者(P均＜0.05);转染NFATc1突变型质粒的C3H10T1/2细胞中,加入miR-124模拟物与加入miR-124抑制物的荧光素酶活性无变化(P＞0.05).蛋白免疫印迹法与实时定量PCR结果均显示,转染miR-124组与si-NFATc1组的NFATc1表达水平低于Control组(P均＜0.01),miR-124组与si-NFATc1组的NFATc1表达水平相近(P＞0.05).过表达miR-124后,NFATc1大约降低了60％,而这种降低可被miR-124抑制物逆转.转染N FATc1野生型质粒的miR-124模拟物组的NFATc1荧光素酶活性减低(P均＜0.05),转染NFATc1突变型质粒的miR-124模拟物组NFATc1荧光素酶活性无变化(P均＞0.05).结论 miR-124通过抑制靶基因NFATc1的表达调控C3H10T1/2细胞软骨分化.