摘要:

目的 探究血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)通过激活小G蛋白Rac1促进心肌细胞肥大的机制.方法 构建Ad-Rac1、Ad-Rac1-V12腺病毒,转染HEK293T细胞,收集样本并通过基因芯片筛选出有表达差异的基因.将上述2种腺病毒转染心肌细胞,通过GST pull down实验检测Active Rac1的表达情况.通过Western印迹法检测成纤维细胞生长因子13(fibroblast growth factor 13,FGF13)的表达差异.将乳鼠心肌细胞转染siRNA,并分成4个实验组进行处理:Ad-Vector组、Ad-Rac1组、Ad-Rac1-V12组、共转染Ad-Rac1-V12及FGF13-Si3组,检测各组心房利钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-Mhc)表达差异及心肌细胞面积的变化.采用Ang Ⅱ刺激心肌细胞,并加入Rac1特异性抑制剂NSC23766,检测各组FGF13表达差异以及心肌细胞面积的变化.结果 基因芯片结果表明Ad-Rac1-V12组有402个相对于Ad-Rac1组的差异基因,其中FGF13上调(28±1.2)倍.与Ad-Rac1组相比,Ad-Rac1-V12组Active Rac1、FGF13表达显著上调(P＜0.05).与Ad-Rac1-V12组相比,共转染Ad-Rac1-V12及siRNA-3组的Anp、β-Mhc表达显著降低(P＜0.05),心肌细胞表面积明显减小(P＜0.05).与对照组相比,Ang Ⅱ刺激组Anp、β-Mhc、Active Rac1、FGF13表达明显上调,心肌细胞表面积增加.与Ang Ⅱ刺激组相比,Ang Ⅱ+NSC23766组FGF13表达明显下调,心肌细胞面积减少(P＜0.05).结论 血管紧张素Ⅱ通过激活小G蛋白Rac1来上调FGF13的表达可能是其导致心肌细胞肥大的一条新通路.

摘要:

目的 研究AngⅡ激活Rac1后,其下游促进心肌纤维化的新机制.方法(1)构建Ad-Rac1、Ad-Rac1-V12腺病毒,转染心房成纤维细胞(atrial fibroblasts,AFs),收集样本通过Western Blot法检测Fgf13的表达差异;(2)用AngⅡ刺激AFs,并加入Rac1特异性抑制剂NSC23766,检测Fgf13表达变化;(3)培养大鼠原代AFs并分三组进行处理:Ad-Vector组、Ad-Rac1-V12组及Ad-Rac1-V12+Si-Fgf13组,检测各组AFs的Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、α-SMA的表达变化;(4)CCK-8及细胞划痕实验检测各组细胞增殖及迁移能力.结果AngⅡ刺激后活化型Rac1表达显著升高(P<0.05).AFs转染腺病毒后发现,且相较于Ad-Rac1组,Ad-Rac1-V12组Fgf13、CollagenⅠ及 α-SMA表达均显著上调(P<0.05).而使用Rac1特异性抑制剂NSC23766后,Fgf13表达量均显著下降(P<0.05).此外,使用小干扰技术抑制Fgf13表达后,发现与Ad-Rac1-V12组相比,Ad-Rac1-V12+Si-Fgf13组CollagenⅠ、α-SMA表达降低,AFs增殖、迁移能力下降(P<0.05).结论血管紧张素Ⅱ可通过激活小G蛋白Rac1上调Fgf13的表达,进而促进心房成纤维细胞增殖迁移及纤维化相关蛋白的表达.