摘要:

从质粒pGEM-HA中扩增H5N1亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)血凝素(Hemagglutinin,HA)基因,构建转移载体pFastBacHT-HA并与大肠杆菌(Escherichia coli)DH10Bac中的Bacmid质粒重组,构建重组转座质粒rBacmid-HA.在脂质体介导下将rBacmid-HA转染sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒.在sf9昆虫细胞中表达HA蛋白,通过SDS-PAGE、Western blot和血细胞吸附试验鉴定重组蛋白.结果显示,重组HA蛋白分子量约为66 kD,该蛋白与AIV H5亚型鸡血清发生特异性反应,与H7和H9亚型鸡血清不反应,转染重组杆状病毒后的细胞能吸附鸡的红血球,证明HA基因在sf9昆虫细胞中获得了正确表达,不仅具有亚型特异性,而且有良好的生物反应性.

摘要:

目的 在昆虫细胞中表达亚洲1型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因,为进一步研究FMDV空衣壳抗原和疫苗奠定基础.方法 从质粒pTOP-P1-2A和pTOP-3C中分别扩增出编码亚洲1型口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1-2A基因和3C蛋白酶基因,构建转移载体pDual-P1-2A-3C并与大肠杆菌(Escherichia coli)DH10Bac中的Bacmid质粒重组,构建重组转座质粒rBacmid-P1-3C.在脂质体介导下将rBaemid-P1-3C转染Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒.在Sf9昆虫细胞中共表达P1-2A和3C蛋白,通过SDS-PAGE、Western blot和Dot-ELISA试验鉴定重组蛋白.结果 目的基因在昆虫细胞中得到了正确的表达,表达蛋白与抗亚洲1型FMDV血清发生特异性反应.有良好的抗原性.结论 成功在昆虫细胞中表达亚洲1型口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因.