摘要:

稀有糖D-阿洛酮糖在食品、医药、保健等领域显示了巨大的应用潜能,然而以较高的收率大量生产D-阿洛酮糖依然面临着挑战.前期研究表明,属于磷酸二羟基丙酮(dihydroxyacetone phosphate,DHAP)依赖型醛缩酶家族的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶(RhaD)在以D-甘油醛为醛受体时,失去了对该醛受体的立体选择性,生成D-阿洛酮糖和D-山梨糖两种稀有糖,两者比例接近1∶1.为了对RhaD醛缩酶的立体选择性进行优化使其专一性地生产D-阿洛酮糖,对RhaD醛缩酶的152位酪氨酸进行了19种其他氨基酸的定点饱和突变,发现RhaDY152A突变体倾向于生成D-阿洛酮糖,D-阿洛酮糖和D-山梨糖的比例从最初的1∶1显著提高到8∶1,为下一步对RhaD醛缩酶分子改造进而定向合成单一产物D-阿洛酮糖提供理论依据.

摘要:

本发明公开了L‑鼠李树胶糖‑1‑磷酸醛缩酶及其在催化合成稀有糖D‑山梨糖中的应用，其基因序列为由SEQIDNO.1编码的野生型L‑鼠李树胶糖‑1‑磷酸醛缩酶分别经过其氨基酸第115、116、148、188或152位饱和定点突变。本发明通过对RhaD的氨基酸位点进行定点突变，克服了野生型RhaD催化合成D‑山梨糖没有立体选择性的缺陷，实现了RhaD催化D‑甘油醛为醛受体合成D‑山梨糖时的立体选择性，使得催化反应产物以D‑山梨糖为主，经过突变的RhaD的酶活高。本发明方法制备的定点突变的RhaD制备D‑山梨糖，合成效率高、工艺简单、节约成本、D‑山梨糖立体选择性催化效率最高达到91.7％。

摘要:

本发明公开了L‑鼠李树胶糖‑1‑磷酸醛缩酶及其在催化合成稀有糖D‑阿洛酮糖中的应用，其基因序列为由SEQ ID NO.1编码的野生型L‑鼠李树胶糖‑1‑磷酸醛缩酶分别经过其氨基酸第29、188、266或152位饱和定点突变。本发明克服了野生型RhaD产生D‑阿洛酮糖:D‑山梨糖＝1：1没有立体选择性的缺陷，使得催化反应仅产生D‑阿洛酮糖或以D‑阿洛酮糖为主，且经过突变的RhaD的酶活较高。本发明方法制备的定点突变的RhaD制备D‑阿洛酮糖，合成效率高、工艺简单、节约成本、D‑阿洛酮糖催化效率最高达到100％，利用本发明方法实现了工业化RhaD催化D‑甘油醛大量合成D‑阿洛酮糖。